本文關(guān)鍵詞：LXA4干預(yù)尿酸誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)機制研究

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【摘要】：目的:探討脂氧素A4(LXA4)干預(yù)尿酸(Uric acid,UA)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng),并初步探討其可能的機制。方法:1.培養(yǎng)符合實驗要求的HUVEC。2.UA作用最佳濃度及作用最佳時間選擇:以不同濃度UA(0mg/dL,4mg/dL,8mg/dL,12mg/dL,16mg/dL)與HUVEC作用24h,或選擇12mg/dL濃度UA按不同時間(0h、3h,6h,12h,24h,48h)與HUVEC作用,利用二氯二氫熒光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)作為熒光探針測定HUVEC活性氧(Reactive oxygen species,ROS)生成量。3.LXA4作用最佳濃度及作用最佳時間選擇:選擇不同濃度LXA4(0nM、1nM、10nM、100nM)或不同時間(0min、15 min、30 min、1h、2h)對HUVEC預(yù)處理,選擇12mg/dL濃度UA作用24h后,利用DCFH-DA測定HUVEC生成ROS量。4.不同抑制劑干預(yù)作用:以LXA4(100nM)、二甲苯基碘(10μM)、魚藤酮(1μM),進行預(yù)處理,選擇12mg/dL濃度UA與HUVEC作用24h后,檢測ROS生成量。5.HUVEC內(nèi)NADPH氧化酶活性:將實驗分為對照組、UA組、LAX4組,UA+LXA4組,采用光澤精增強的化學(xué)發(fā)光法測定NADPH氧化酶活性。6.NADPH氧化酶p47phox亞基表達(dá):將實驗分為對照組、UA組、LAX4組,UA+LXA4組,分別提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜蛋白,免疫印跡法(Western Blot)測定NADPH氧化酶亞基p47phox在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.UA溶液可以誘導(dǎo)HUVEC生成ROS,呈濃度依賴和時間依賴,P0.05;在12mg/dL濃度作用24h時間點UA刺激HUVEC生成ROS量最大,P0.05。2.與UA刺激組比較,LXA4可以降低12mg/dL的UA作用24h誘導(dǎo)HUVEC生成ROS的量,P0.05;與UA刺激組比較,DPI也可以明顯降低高濃度UA誘導(dǎo)HUVEC生成ROS的量,P0.05;但魚藤酮對UA誘導(dǎo)HUVEC生成ROS干預(yù)不明顯,P0.05。3.與對照組比較,UA組NDAPH氧化酶活性明顯增加,P0.05,而單獨LXA4組無明顯變化,P0.05;與UA刺激組比較,LXA4+UA組NDAPH氧化酶活性明顯下降,P0.05。4.NDAPH氧化酶p47phox蛋白表達(dá)量:(1)在胞質(zhì):與對照組比較,UA刺激組p47phox含量明顯下降,而在LXA4預(yù)先干預(yù)后,p47phox含量明顯增加,P0.05;(2)在胞膜:與對照組比較,UA刺激組p47phox含量明顯增加,在LXA4預(yù)先干預(yù)后,p47phox含量明顯降低,P0.05。結(jié)論:LXA4可以抑制高濃度UA溶液誘導(dǎo)HUVEC發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)生成ROS,其可能的機制是通過阻止NADPH氧化酶亞基p47phox由胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到胞膜來抑制NADPH氧化酶激活,從而減少ROS的生成。
【關(guān)鍵詞】：脂氧素A4 尿酸 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 氧化應(yīng)激反應(yīng) 活性氧
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589.7
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-21
• 第一部分 尿酸誘導(dǎo)HUVEC發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)生成ROS21-28
• 實驗方法21-23
• 結(jié)果23-25
• 討論25-28
• 第二部分LXA4干預(yù)UA誘導(dǎo)HUVEC發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)生成ROS的機制28-46
• 實驗方法28-34
• 結(jié)果34-39
• 討論39-46
• 結(jié)論46-47
• 不足與展望47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 綜述：脂氧素調(diào)控炎癥信號通路的研究進展53-65
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 附錄65-67
• 個人簡歷67

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1 王泓;許迅;;氧化應(yīng)激反應(yīng)與糖尿病視網(wǎng)膜病變[J];臨床眼科雜志;2009年05期

2 盧永輝;何e，

本文編號：662462