第一部分狼瘡鼠EMP在各臟器表達(dá)特征目的:觀察幼紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞連接蛋白(Erythroblast Macrophage Protein,EMP)在狼瘡鼠組與對(duì)照鼠組各臟器的表達(dá)特點(diǎn)。方法:10只雌性MRL/lpr狼瘡模型鼠,12周齡,體質(zhì)量25.1～30.4(平均27.6)g,動(dòng)物購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。C57BL/6鼠12周齡,體質(zhì)量25.1～30.4(平均27.6)g,動(dòng)物購(gòu)自南京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心.飼養(yǎng)于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,適應(yīng)1周后,脫頸處死。先剝離小鼠四肢肌肉,取小鼠雙側(cè)肱骨及股骨,肱骨放于脫鈣液中侵泡72小時(shí)后固定于石蠟做免疫組化檢測(cè),股骨剪去兩端軟骨露出紅色的骨髓腔.冰上操作,運(yùn)用1ml注射器吸取PBS液反復(fù)沖洗骨髓腔2-3遍,1000r/min,5min離心去上清,提取總RNA,進(jìn)行EMP基因表達(dá)檢測(cè)。同時(shí)取小鼠的肝臟、腎臟、肺臟、脾臟、腦組織,分成兩份,一份放于甲醛中固定用于做EMP免疫組化及免疫熒光雙標(biāo),一份放于液氮中冷藏用于做EMP基因表達(dá)檢測(cè)。結(jié)果:熒光定量PCR檢測(cè)顯示:EMP在狼瘡鼠組各組織均有表達(dá),但在骨髓中表達(dá)最高。,EMP在肝臟(t=2.747,p=0.0...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1：四段EMP-siRNA基因沉默Nr8383巨噬基因沉默效率的檢測(cè)結(jié)果，GACUCCGGAAGAUGAATT-3’片段作為E部分構(gòu)建EMP體內(nèi)基因沉默的轉(zhuǎn)染載體。構(gòu)建EMP干擾腺病毒轉(zhuǎn)染骨髓巨噬質(zhì)粒鑒定CR法獲取基因片段瓊脂糖凝....

放置于含5%CO2，37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后熒光觀察熒光表達(dá)（圖4）。結(jié)果說(shuō)明重組腺病毒轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞成功。293A轉(zhuǎn)染24h熒光圖片（X200）圖4：EMP-shRNA腺病毒轉(zhuǎn)染到啊293A細(xì)胞熒光圖片染擴(kuò)增：將攜帶EMP-shRNA腺病毒感....

好的EMP-shRNA腺病毒轉(zhuǎn)染到狼瘡小鼠的鏡觀察，顯示綠色熒光表達(dá)（圖6）。實(shí)MP表達(dá)量。EMP在轉(zhuǎn)染后骨髓細(xì)胞較轉(zhuǎn)學(xué)意義（P<0.05）（圖7）。表明轉(zhuǎn)染骨胞轉(zhuǎn)染前骨髓巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染后骨髓巨噬細(xì)6：狼瘡小鼠骨髓巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后圖片（S-P×

細(xì)胞圖1：基因沉默組小鼠及空載體腺病毒組狼瘡小鼠骨髓巨噬細(xì)胞熒光圖片（S-P×200）2.2實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)EMP表達(dá)差異，結(jié)果顯示（圖2，表1）：1.基因沉默組小鼠骨髓巨噬細(xì)胞EMP表達(dá)明顯較空白組小鼠骨髓巨噬細(xì)胞表達(dá)低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（T=4.852,P=0.....

本文編號(hào)：4009138