目的本研究在收集正常體重及肥胖個(gè)體網(wǎng)膜脂肪組織,以及構(gòu)建飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠模型的基礎(chǔ)上,明確受試個(gè)體血糖、血脂等一般資料以及網(wǎng)膜脂肪組織G蛋白偶聯(lián)受體120(G Protein Coupled Receptor 120,GPR120)、G蛋白偶聯(lián)受體40(G Protein Coupled Receptor 40,GPR40)與Krüppel樣因子15(Krüppel-Like Factor 15,KLF15)表達(dá)之間的相關(guān)性;在體外培養(yǎng)小鼠脂肪細(xì)胞的基礎(chǔ)上,觀察游離脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)是否通過(guò)上調(diào)/激活GPR120/GPR40/p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信號(hào)通路抑制脂肪細(xì)胞KLF15的表達(dá),繼而導(dǎo)致脂肪細(xì)胞糖代謝紊亂。通過(guò)以上研究,明確FFA對(duì)KLF15表達(dá)的影響,并探討其可能的分子機(jī)制,為臨床尋找治療肥胖、胰島素抵抗、炎癥及相關(guān)代謝疾病新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法(1)以體質(zhì)指數(shù)(Body Mass Index,BMI)為標(biāo)準(zhǔn),將受試個(gè)體分為正常體重組(Nor...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 組織標(biāo)本來(lái)源
    1.2 細(xì)胞系
    1.3 相關(guān)試劑及儀器
        1.3.1 試劑和耗材
        1.3.2 儀器
    1.4 引物序列表
實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 正常及肥胖個(gè)體樣本采集
    2.2 肥胖小鼠模型建立及標(biāo)本采集
    2.3 3T3-L1 細(xì)胞的培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化
        2.3.1 細(xì)胞傳代
        2.3.2 細(xì)胞凍存
        2.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.3.4 誘導(dǎo)液的配制和脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化
        2.3.5 油紅O染色鑒定
    2.4 PA和 OA的配制
        2.4.1 PA和 OA的配制
        2.4.2 0.1 mol/L氫氧化鈉溶液的配制
        2.4.3 30 %BSA溶液配制
        2.4.4 40 mM PA的配制
        2.4.5 40 mM OA的配制
        2.4.6 PA和 OA混合液的配制
    2.5 拮抗劑的配制和使用
        2.5.1 AH7614 的配制和使用
        2.5.2 GW1100 的配制和使用
        2.5.3 SB203580 的配置和使用
    2.6 組織和細(xì)胞系的RNA提取
        2.6.1 組織樣本
        2.6.2 細(xì)胞樣本
        2.6.3 提取過(guò)程
    2.7 cDNA合成及逆轉(zhuǎn)錄
    2.8 Real-time PCR
    2.9 組織和細(xì)胞系的蛋白提取
        2.9.1 組織樣本
        2.9.2 細(xì)胞樣本
    2.10 DNA/RNA和蛋白濃度測(cè)定(超微量分光光度計(jì))
        2.10.1 儀器的校準(zhǔn)
        2.10.2 核酸樣本檢測(cè)
        2.10.3 蛋白樣本檢測(cè)
    2.11 免疫印跡試驗(yàn)
    2.12 生化指標(biāo)檢測(cè)
    2.13 統(tǒng)計(jì)方法
結(jié)果
    一、人體組織實(shí)驗(yàn)
        1.1 受試個(gè)體一般資料及血糖血脂水平比較
        1.2 受試個(gè)體網(wǎng)膜脂肪組織KLF15的m RNA和蛋白表達(dá)水平比較
        1.3 受試個(gè)體網(wǎng)膜脂肪組織KLF15的m RNA表達(dá)水平與一般資料和生化指標(biāo)的相關(guān)性分析
    二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.1 構(gòu)建肥胖小鼠模型
        2.2 小鼠內(nèi)臟脂肪組織KLF15 和相關(guān)因子m RNA表達(dá)的差異比較
        2.3 內(nèi)臟脂肪組織KLF15的m RNA表達(dá)水平與一般資料、生化指標(biāo)和相關(guān)因子的相關(guān)性分析
        2.4 阻斷GPR120 后,HFD小鼠脂肪組織中KLF15 的表達(dá)
        2.5 阻斷GPR40 后,HFD小鼠脂肪組織中KLF15 的表達(dá)
    三、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        3.1 3T3-L1 前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        3.2 棕櫚酸(Palmitic Acid,PA)和油酸(Oleic Acid,OA)混合液對(duì)脂肪細(xì)胞GPR120、GPR40、KLF15 表達(dá)以及p38 MAPK磷酸化的影響
            3.2.1 不同濃度PA和 OA混合液刺激脂肪細(xì)胞,檢測(cè)KLF15、GPR120和GPR40 的表達(dá)水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.2.2 PA和 OA混合液刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷GPR120,檢測(cè)KLF15 的表達(dá)和上清液葡萄糖含量
            3.2.3 PA和 OA混合液刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷GPR40,檢測(cè)KLF15 的表達(dá)和上清液葡萄糖含量
            3.2.4 PA和 OA混合液刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷p38 MAPK磷酸化,檢測(cè)KLF15 的表達(dá)
        3.3 PA對(duì)脂肪細(xì)胞GPR120、GPR40、KLF15 表達(dá)以及p38 MAPK磷酸化的影響
            3.3.1 不同濃度PA刺激脂肪細(xì)胞,檢測(cè)KLF15、GPR120和GPR40 的表達(dá)水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.3.2 1500 μM PA刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷GPR120,檢測(cè)KLF15 的表達(dá)水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.3.3 1500 μM PA刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷GPR40,檢測(cè)KLF15 的表達(dá)水平、p38 MAPK磷酸化水平
            3.3.4 1500 μM PA刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷p38 MAPK磷酸化,檢測(cè)KLF15 及相關(guān)因子表達(dá)水平
        3.4 OA對(duì)脂肪細(xì)胞GPR120、GPR40、KLF15 表達(dá)以及p38 MAPK磷酸化的影響
            3.4.1 不同濃度OA刺激脂肪細(xì)胞,檢測(cè)KLF15、GPR120和GPR40 的表達(dá)水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.4.2 750 μM OA刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷GPR120,檢測(cè)KLF15 的表達(dá)水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.4.3 750 μM OA刺激脂肪細(xì)胞同時(shí)阻斷GPR40,檢測(cè)KLF15 的表達(dá)水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評(píng)閱表



本文編號(hào)：3916339