目的本研究在收集正常體重及肥胖個體網(wǎng)膜脂肪組織,以及構(gòu)建飲食誘導肥胖小鼠模型的基礎(chǔ)上,明確受試個體血糖、血脂等一般資料以及網(wǎng)膜脂肪組織G蛋白偶聯(lián)受體120(G Protein Coupled Receptor 120,GPR120)、G蛋白偶聯(lián)受體40(G Protein Coupled Receptor 40,GPR40)與Krüppel樣因子15(Krüppel-Like Factor 15,KLF15)表達之間的相關(guān)性;在體外培養(yǎng)小鼠脂肪細胞的基礎(chǔ)上,觀察游離脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)是否通過上調(diào)/激活GPR120/GPR40/p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信號通路抑制脂肪細胞KLF15的表達,繼而導致脂肪細胞糖代謝紊亂。通過以上研究,明確FFA對KLF15表達的影響,并探討其可能的分子機制,為臨床尋找治療肥胖、胰島素抵抗、炎癥及相關(guān)代謝疾病新靶點提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法(1)以體質(zhì)指數(shù)(Body Mass Index,BMI)為標準,將受試個體分為正常體重組(Nor...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
前言
實驗材料
    1.1 組織標本來源
    1.2 細胞系
    1.3 相關(guān)試劑及儀器
        1.3.1 試劑和耗材
        1.3.2 儀器
    1.4 引物序列表
實驗方法
    2.1 正常及肥胖個體樣本采集
    2.2 肥胖小鼠模型建立及標本采集
    2.3 3T3-L1 細胞的培養(yǎng)和誘導分化
        2.3.1 細胞傳代
        2.3.2 細胞凍存
        2.3.3 細胞復蘇
        2.3.4 誘導液的配制和脂肪細胞誘導分化
        2.3.5 油紅O染色鑒定
    2.4 PA和 OA的配制
        2.4.1 PA和 OA的配制
        2.4.2 0.1 mol/L氫氧化鈉溶液的配制
        2.4.3 30 %BSA溶液配制
        2.4.4 40 mM PA的配制
        2.4.5 40 mM OA的配制
        2.4.6 PA和 OA混合液的配制
    2.5 拮抗劑的配制和使用
        2.5.1 AH7614 的配制和使用
        2.5.2 GW1100 的配制和使用
        2.5.3 SB203580 的配置和使用
    2.6 組織和細胞系的RNA提取
        2.6.1 組織樣本
        2.6.2 細胞樣本
        2.6.3 提取過程
    2.7 cDNA合成及逆轉(zhuǎn)錄
    2.8 Real-time PCR
    2.9 組織和細胞系的蛋白提取
        2.9.1 組織樣本
        2.9.2 細胞樣本
    2.10 DNA/RNA和蛋白濃度測定(超微量分光光度計)
        2.10.1 儀器的校準
        2.10.2 核酸樣本檢測
        2.10.3 蛋白樣本檢測
    2.11 免疫印跡試驗
    2.12 生化指標檢測
    2.13 統(tǒng)計方法
結(jié)果
    一、人體組織實驗
        1.1 受試個體一般資料及血糖血脂水平比較
        1.2 受試個體網(wǎng)膜脂肪組織KLF15的m RNA和蛋白表達水平比較
        1.3 受試個體網(wǎng)膜脂肪組織KLF15的m RNA表達水平與一般資料和生化指標的相關(guān)性分析
    二、動物實驗
        2.1 構(gòu)建肥胖小鼠模型
        2.2 小鼠內(nèi)臟脂肪組織KLF15 和相關(guān)因子m RNA表達的差異比較
        2.3 內(nèi)臟脂肪組織KLF15的m RNA表達水平與一般資料、生化指標和相關(guān)因子的相關(guān)性分析
        2.4 阻斷GPR120 后,HFD小鼠脂肪組織中KLF15 的表達
        2.5 阻斷GPR40 后,HFD小鼠脂肪組織中KLF15 的表達
    三、體外細胞實驗
        3.1 3T3-L1 前脂肪細胞的培養(yǎng)及誘導分化
        3.2 棕櫚酸(Palmitic Acid,PA)和油酸(Oleic Acid,OA)混合液對脂肪細胞GPR120、GPR40、KLF15 表達以及p38 MAPK磷酸化的影響
            3.2.1 不同濃度PA和 OA混合液刺激脂肪細胞,檢測KLF15、GPR120和GPR40 的表達水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.2.2 PA和 OA混合液刺激脂肪細胞同時阻斷GPR120,檢測KLF15 的表達和上清液葡萄糖含量
            3.2.3 PA和 OA混合液刺激脂肪細胞同時阻斷GPR40,檢測KLF15 的表達和上清液葡萄糖含量
            3.2.4 PA和 OA混合液刺激脂肪細胞同時阻斷p38 MAPK磷酸化,檢測KLF15 的表達
        3.3 PA對脂肪細胞GPR120、GPR40、KLF15 表達以及p38 MAPK磷酸化的影響
            3.3.1 不同濃度PA刺激脂肪細胞,檢測KLF15、GPR120和GPR40 的表達水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.3.2 1500 μM PA刺激脂肪細胞同時阻斷GPR120,檢測KLF15 的表達水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.3.3 1500 μM PA刺激脂肪細胞同時阻斷GPR40,檢測KLF15 的表達水平、p38 MAPK磷酸化水平
            3.3.4 1500 μM PA刺激脂肪細胞同時阻斷p38 MAPK磷酸化,檢測KLF15 及相關(guān)因子表達水平
        3.4 OA對脂肪細胞GPR120、GPR40、KLF15 表達以及p38 MAPK磷酸化的影響
            3.4.1 不同濃度OA刺激脂肪細胞,檢測KLF15、GPR120和GPR40 的表達水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.4.2 750 μM OA刺激脂肪細胞同時阻斷GPR120,檢測KLF15 的表達水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
            3.4.3 750 μM OA刺激脂肪細胞同時阻斷GPR40,檢測KLF15 的表達水平、p38 MAPK磷酸化水平以及上清液葡萄糖含量
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
作者簡介
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本文編號：3916339