目的CASK即鈣/鈣調(diào)蛋白依賴的絲氨酸激酶,是一種多功能蛋白。據(jù)文獻(xiàn)報道,CASK主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),且在膜蛋白跨膜運輸和胞吐過程中扮演著重要角色,目前CASK在神經(jīng)病理性疼痛中所起的作用尚不太清楚。本研究旨在探討CASK在糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛中對嘌呤能受體表達(dá)的作用。方法1.在180-200 g雄性SD大鼠腹腔一次性注射STZ誘導(dǎo)糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛模型。2.足底注射熒光素（Di I）逆行標(biāo)記足底組織特異性脊髓背根神經(jīng)節(jié)（DRG）神經(jīng)元胞體。3.運用Western Blotting檢測CASK及嘌呤能受體在足底組織特異性DRG（L4-L6）中的表達(dá)水平。4.運用后足撤回反射評測正常大鼠和糖尿病大鼠對機(jī)械刺激和熱刺激的行為反應(yīng)。結(jié)果1.行為學(xué)顯示,糖尿病大鼠造模兩周后有顯著的痛覺過敏現(xiàn)象,表現(xiàn)為機(jī)械痛痛閾行為學(xué)評分和熱痛痛閾行為學(xué)評分異常;2.與對照組比較,DM大鼠足底組織特異性DRG中CASK及P2X2（嘌呤能受體,配體門控陽離子通道,2）受體表達(dá)水平顯著升高;3.鞘內(nèi)注射CASK的慢病毒能夠顯著降低ATP（三磷酸腺苷）電流密度和P2X2受體的表達(dá);4.鞘內(nèi)注射CASK的慢病... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 材料與方法
    2.1 實驗對象
    2.2 糖尿病（Diabetics Mellitus，DM）大鼠模型的建立
        2.2.1 實驗用藥
        2.2.2 造模方法
    2.3 機(jī)械痛閾檢測
        2.3.1 實驗儀器
        2.3.2 實驗用藥
        2.3.3 測試方法
    2.4 熱痛閾檢測
        2.4.1 實驗儀器
        2.4.2 實驗用藥
        2.4.3 測試方法
    2.5 運動功能測試（Rotarod test）
        2.5.1 實驗儀器
        2.5.2 實驗內(nèi)容
    2.6 組織特異性DRG神經(jīng)元的標(biāo)記、急性分離與培養(yǎng)
        2.6.1 實驗儀器
        2.6.2 實驗試劑
        2.6.3 熒光染料DiI標(biāo)記足底相關(guān)DRG神經(jīng)元
        2.6.4 DRG神經(jīng)元的急性分離
    2.7 全細(xì)胞膜片鉗實驗
        2.7.1 實驗儀器
        2.7.2 實驗試劑及藥品
        2.7.3 拉制玻璃微電極
        2.7.4 全細(xì)胞膜片鉗記錄
        2.7.5 神經(jīng)元興奮性記錄
        2.7.6 數(shù)據(jù)分析
    2.8 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.8.1 實驗試劑
        2.8.2 實驗儀器
        2.8.3 DMEM培養(yǎng)基的配置
        2.8.4 細(xì)胞系/株的培養(yǎng)
        2.8.5 慢病毒包裝及細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.8.6 細(xì)胞成像
    2.9 Western Blotting檢測蛋白表達(dá)
        2.9.1 實驗試劑
        2.9.2 實驗儀器
        2.9.3 實驗方法
    2.10 qRT-PCR檢測目的基因mRNA含量
        2.10.1 總RNA的提取
        2.10.2 cDNA的合成
        2.10.3 實時定量PCR
        2.10.4 實時定量PCR數(shù)據(jù)分析
    2.11 免疫細(xì)胞化學(xué)
        2.11.1 實驗試劑
        2.11.2 實驗儀器
        2.11.3 實驗方法
    2.12 免疫共沉淀
        2.12.1 實驗試劑
        2.12.2 實驗儀器
        2.12.3 實驗方法
        2.12.4 注意事項
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 CASK/嘌呤能受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與DM大鼠的足底痛覺過敏的形成
        3.1.1 腹腔注射STZ誘導(dǎo)成年大鼠痛覺行為學(xué)評分顯著降低
        3.1.2 CASK基因在DM組大鼠DRG中轉(zhuǎn)錄、表達(dá)水平顯著增強(qiáng)
        3.1.3 P2X2基因在DM組大鼠DRG中表達(dá)水平顯著增強(qiáng)
        3.1.4 CASK shRNA和CASK scrRNA的感染效率無明顯差異
        3.1.5 CASK shRNA顯著降低DM大鼠足底特異性DRG神經(jīng)元ATP電流密度
        3.1.6 CASK shRNA顯著反轉(zhuǎn)P2X2基因在DM組大鼠DRG中表達(dá)水平
        3.1.7 CASK 和嘌呤能受體之間的相互作用
        3.1.8 CASK shRNA顯著升高了DM大鼠的痛覺行為學(xué)評分
第四章 討論
    4.1 CASK的輔轉(zhuǎn)錄因子作用
    4.2 CASK的蛋白激酶功能
    4.3 CASK的支架蛋白功能
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
Review
    References
致謝



本文編號：3686794