目的:探討細胞焦亡（pyroptosis）能否介導(dǎo)高糖（HG;45 mmol/L葡萄糖）引起的小鼠胚胎成骨細胞MC3T3-E1炎癥和損傷。方法:應(yīng)用細胞計數(shù)試劑盒8（CCK-8）檢測成骨細胞活力;Western blot測定成骨細胞的核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）和胱天蛋白酶1（CASP1）的表達水平;ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清液中白細胞介素18（IL-18）和IL-1β的水平;2’,7’-二氯二氫熒光素二乙酯染色熒光顯微鏡照相法檢測胞內(nèi)活性氧（ROS）水平;羅丹明123染色熒光顯微鏡照相法測定線粒體膜電位（MMP）水平;堿性磷酸酶（ALP）試劑盒測定成骨細胞早期標志物ALP的活性;茜素紅染色觀察成骨細胞晚期標志物礦化結(jié)節(jié)的形成。結(jié)果:HG處理MC3T3-E1細胞24 h可明顯促進NLRP3和CASP1的表達,引起IL-18和IL-1β的分泌增多,同時可使細胞活力降低,ROS生成和MMP丟失增加,成骨細胞分化與礦化功能下降（表現(xiàn)為ALP活性降低和礦化結(jié)節(jié)數(shù)量減少）。利用siRNA沉默CASP1表達可顯著減輕HG引起的上述成骨細胞炎癥和損傷。結(jié)論:焦亡可介導(dǎo)HG引起的... 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 實驗分組
        2.3 CASP1-siRNA細胞轉(zhuǎn)染和最佳干擾序列的篩選
        2.4 成骨細胞誘導(dǎo)分化
        2.5 CCK-8法測定細胞存活率
        2.6 Western blot法檢測NLRP3和CASP1蛋白表達水平
        2.7 ELISA法檢測IL-18和IL-1β水平
        2.8 DCFH-DA染色熒光顯微鏡照相法檢測細胞內(nèi)ROS水平
        2.9 Rh123染色熒光顯微鏡測定成骨細胞線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential,MMP)
        2.1 0 ALP活性測定
        2.1 1 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色
    3 統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1 HG上調(diào)成骨細胞NLRP3和CASP1蛋白的表達
    2 CASP1-siRNA最佳干擾序列的篩選
    3 沉默CASP1基因抑制HG對成骨細胞的毒性
    4 沉默CASP1基因減少HG引起的成骨細胞炎癥因子分泌
    5 沉默CASP1基因抑制HG引起的成骨細胞氧化應(yīng)激反應(yīng)
    6 沉默CASP1基因抑制HG引起的MMP丟失
    7 沉默CASP1基因減輕HG對ALP活性的抑制
    8 沉默CASP1基因可對抗HG引起的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量減少
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]WJD 5h Anniversary Special Issues（1）:Insulin Insulin and bone:Recent developments[J]. Gordon L Klein.  World Journal of Diabetes. 2014(01)
[2]高糖通過提高ROS水平和鈣超載誘導(dǎo)小鼠MC3T3-E1成骨細胞凋亡[J]. 郭寶磊,楊茂偉,梁單,曹軍軍,楊蕾,郭曉東.  中國病理生理雜志. 2012(02)



本文編號：3685548