骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis,OP）是一種退行性骨骼疾病,隨著老齡化社會的到來,骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為一種常見病和多發(fā)病。骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少,骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞導(dǎo)致骨脆性增加和骨折危險(xiǎn)性增加為特征的一種系統(tǒng)性、全身性骨骼疾病。多發(fā)于老年人和絕經(jīng)后的婦女,發(fā)病后多伴有疼痛,更有嚴(yán)重者將發(fā)生骨折等,嚴(yán)重危害著人們的健康。臨床治療主要采用藥物療法,但是缺少理想的預(yù)防手段,目前的研究發(fā)現(xiàn)低頻率電磁場具有預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥的作用,其是一種無創(chuàng)傷,非侵入性的治療方法,但是存在臨床的可重復(fù)性差以及作用機(jī)理不清楚等缺點(diǎn),因此限制了其大規(guī)模的臨床應(yīng)用。分析文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)可重復(fù)性差的主要原因是,目前對與電磁場治療骨質(zhì)疏松癥的參數(shù)尚無一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)電磁場的作用機(jī)制不清楚,基于這些問題課題組經(jīng)過多年的研究獲得了一些參數(shù)。課題組之前篩選的最佳作用成骨細(xì)胞成熟與礦化的參數(shù),50 Hz 0.6 mT脈沖電磁場具有有效的促進(jìn)體外培養(yǎng)大鼠顱骨成骨細(xì)胞（ROBs）成熟與礦化的作用,但是其作用機(jī)理尚不完全清楚�；谄渥饔脵C(jī)理尚不清楚的問題本論文展開了研究。目前研究認(rèn)為雌激素信號通路與骨質(zhì)疏松癥的關(guān)系及其密切,那么... 

【文章來源】：蘭州理工大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫詞表
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病及現(xiàn)狀
        1.1.1 骨質(zhì)疏松癥分類
        1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病狀況及其危害
        1.1.3 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制
        1.1.4 骨質(zhì)疏松癥的藥物治療
    1.2 低頻電磁場促進(jìn)骨形成的研究
        1.2.1 電磁場防治骨質(zhì)疏松癥的臨床應(yīng)用研究
        1.2.2 電磁場促進(jìn)骨形成的機(jī)制
    1.3 初級纖毛
        1.3.1 初級纖毛簡介
        1.3.2 初級纖毛的功能
        1.3.3 電磁場通過初級纖毛調(diào)節(jié)骨形成
    1.4 雌激素受體(ER)
        1.4.1 雌激素受體結(jié)構(gòu)和功能
        1.4.2 ERα促進(jìn)骨形成
        1.4.3 雌激素受體α與IGF-1R的關(guān)系
    1.5 存在的問題
    1.6 本課題主要研究內(nèi)容
第2章 雌激素受體參與了PEMFs促進(jìn)骨形成的過程
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.2.2 磁場最佳干預(yù)時(shí)間的篩選
        2.2.3 ICI182780對成骨細(xì)胞預(yù)處理
        2.2.4 堿性磷酸酶(ALP)活性的測定
        2.2.5 Westernblot蛋白分析
        2.2.6 RealTimeRT-PCR分析
        2.2.7 堿性磷酸酶染色
        2.2.8 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 最佳干預(yù)時(shí)間篩選結(jié)果
        2.3.2 堿性磷酸酶活性測定結(jié)果
        2.3.3 Westernblot蛋白檢測結(jié)果
        2.3.4 RealTimeRT-PCR基因檢測結(jié)果
        2.3.5 堿性磷酸酶染色結(jié)果
        2.3.6 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色結(jié)果
    2.4 討論
第3章 PEMFs通過ERα促進(jìn)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞成熟礦化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        3.2.2 PEMFs促進(jìn)骨形成對雌二醇含量及雌激素受體α的影響
        3.2.3 ERαsiRNA質(zhì)粒載體構(gòu)建及其制備
        3.2.4 ERαsiRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至ROBs細(xì)胞
        3.2.5 成骨性分化分析
        3.2.6 堿性磷酸酶(ALP)活性的測定
        3.2.7 Westernblot蛋白分析
        3.2.8 RealTimeRT-PCR分析
        3.2.9 堿性磷酸酶染色
        3.2.10 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 PEMFs對雌激素和雌激素受體α的影響
            3.3.1.1 細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.3.1.2 動(dòng)物水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.2 最佳干擾序列篩選結(jié)果
        3.3.3 PEMFs對ERα表達(dá)抑制ROBs細(xì)胞的ERα表達(dá)分析
        3.3.4 PEMFs對ERα表達(dá)抑制的ROBs細(xì)胞ALP活性的影響
        3.3.5 PEMFs對ERα表達(dá)抑制的ROBs細(xì)胞中成骨相關(guān)基因和蛋白結(jié)果
        3.3.6 PEMFs對ERα表達(dá)抑制的ROBs細(xì)胞堿性磷酸酶染色結(jié)果
        3.3.7 PEMFs對ERα表達(dá)抑制的ROBs細(xì)胞茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色結(jié)果
    3.4 討論
第4章 IGF-1R參與了PEMFs促進(jìn)體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞成熟與礦化的過程
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        4.2.2 成骨性分化分析
        4.2.3 ALP活性的測定
        4.2.4 Westernblot蛋白測定
        4.2.5 RealTimeRT-PCR基因檢測
        4.2.6 堿性磷酸酶染色
        4.2.7 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色
        4.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 阻斷IGF-1R后PEMFs對ALP活性的影響
        4.3.2 Westernblot成骨相關(guān)蛋白檢測結(jié)果
        4.3.3 RealTimeRT-PCR基因檢測結(jié)果
        4.3.4 堿性磷酸酶染色結(jié)果
        4.3.5 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色結(jié)果
    4.4 討論
第5章 PEMFs促進(jìn)細(xì)胞成熟礦化過程中激活ERK1/2信號通路
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        5.2.2 成骨性分化分析
        5.2.3 ALP活性的測定
        5.2.4 Westernblot蛋白測定
        5.2.5 RealTimeRT-PCR基因檢測
        5.2.6 堿性磷酸酶染色
        5.2.7 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色
        5.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 阻斷ERK1/2后PEMFs對ALP活性的影響
        5.3.2 Westernblot成骨相關(guān)蛋白檢測結(jié)果
        5.3.3 RealTimeRT-PCR基因檢測結(jié)果
        5.3.4 堿性磷酸酶染色結(jié)果
        5.3.5 茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色結(jié)果
        5.3.6 阻斷ERK1/2對相關(guān)信號通路信號蛋白的影響
    5.4 討論
第6章 PEMFs通過初級纖毛促進(jìn)骨形成過程中激活了ERα/IGF-1R信號通路
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        6.2.2 siRNAIFT88質(zhì)粒提取
        6.2.3 Westernblot蛋白測定
        6.2.4 初級纖毛與IGF-1R免疫熒光共定位
        6.2.5 對成骨細(xì)胞中IFT88進(jìn)行RNAi后免疫組織化學(xué)染色
        6.2.6 細(xì)胞核蛋白的提取
        6.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 初級纖毛與IGF-1R共定位結(jié)果
        6.3.2 干擾IFT88結(jié)果
        6.3.3 干擾IFT88后初級纖毛發(fā)生率統(tǒng)計(jì)結(jié)果
        6.3.4 對IFT88進(jìn)行RNAi后對相關(guān)信號通路信號蛋白的影響
        6.3.5 對IFT88進(jìn)行RNAi后PEMFs對pERα核轉(zhuǎn)位影響
        6.3.6 阻斷IGF-1R對相關(guān)信號通路信號蛋白的影響
        6.3.7 干擾掉Erα后對IGF-1R/ERK12信號途徑的影響
    6.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄 A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]骨質(zhì)疏松癥的藥物治療[J]. 馮穎,修玲玲,蘇磊.  醫(yī)學(xué)綜述. 2014(01)
[8]MAPK-ERK1/2信號通路調(diào)控成骨性基因表達(dá)和細(xì)胞增殖[J]. 丁道芳,李玲慧,宋奕,杜國慶,衛(wèi)曉恩,曹月龍.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(10)
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本文編號：3622838