目的1.研究干擾素刺激核酸外切酶基因20kDa（Interferon-stimulated exonuclease gene 20,ISG20）在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞（Rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA FLS）中的生物學(xué)功能;2.研究ISG20在RA FLS中異常表達(dá)的調(diào)控機(jī)制;3.研究ISG20調(diào)控RA FLS生物學(xué)活性的分子機(jī)制。方法設(shè)計(jì)并合成靶向ISG20的小干擾（small interfering RNA,siRNA）,轉(zhuǎn)染RA FLS細(xì)胞后沉默ISG20的表達(dá),陰性對(duì)照組（negative siRNA,NC）,檢測(cè)干擾效率并篩選出干擾效率最佳的siRNA序列,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);構(gòu)建過(guò)表達(dá)ISG20的重組腺病毒載體上調(diào)RA FLS中ISG20的表達(dá),采用RT-qPCR和Western blot確認(rèn)ISG20的表達(dá);MTS法檢測(cè)ISG20對(duì)RA FLS細(xì)胞增殖能力的影響;體外管腔形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RA FLS中ISG20表達(dá)水平對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞CRL-1730細(xì)胞血管形成能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ISG... 

【文章來(lái)源】：濟(jì)南大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞共培養(yǎng)體系示意圖

36Figure 4.2 The number of key pathways related gene in siISG20 compared with NC. ( A) Down-regulatedsignaling pathways and the number of related genes. ( B) Up-regulated signaling pathways and the numberof related genes.圖 4.2 siISG20 與 NC 相比各關(guān)鍵通路功能相關(guān)基因變化。（A）下調(diào)的信號(hào)通路和基因數(shù)量。（B）上調(diào)的信號(hào)通路和基因數(shù)量。由上圖我們可以發(fā)現(xiàn) ISG20 在 RA FLS 中影響的通路較多，結(jié)合 RA 發(fā)病機(jī)制和ISG20 的特點(diǎn)，我們篩選整理可能與 RA 有關(guān)的通路（如圖 4.3）。

Figure 4.3 The number of key signal pathway genes in siISG20 compared with NC. P<0.0圖 4.3 siISG20 與 NC 相比關(guān)鍵信號(hào)通路基因數(shù)量變化。P <0.054.1.4 ISG20 對(duì)關(guān)鍵信號(hào)通路和 mRNA 的調(diào)控由于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)量較大，我們只對(duì)其中與 RA 密切相關(guān)的關(guān)鍵通路進(jìn)行了ISG20 的抗病毒活性是當(dāng)前研究中最重要的功能機(jī)制，也因此獲得我們的關(guān)注[32我們的篩選策略是：1.在轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果中，沉默 ISG20 與 NC 相比該基因升高。2.該基因?qū)儆诓《鞠嚓P(guān)的信號(hào)通路。3.該基因在相關(guān)文獻(xiàn)中報(bào)道具有抑制用。綜合上述三點(diǎn)，我們共篩選出 PTEN 和 PPARα 兩個(gè)潛在基因[46,47]�；蜣D(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果基因名稱 芯片相關(guān)通路 變化倍數(shù)PTEN PI3K-Akt signaling pathway 3.56PPARα Hepatitis C 3.08

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巨噬細(xì)胞及其表達(dá)和分泌產(chǎn)物在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用[J]. 奚正德,葛海良.  自然雜志. 2009(05)
[2]滑膜成纖維細(xì)胞在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的作用[J]. 侯亞楠,郭禮和.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2009(02)
[3]關(guān)節(jié)炎性骨侵蝕和骨保護(hù)蛋白的作用[J]. 奚正德,張冬青.  自然雜志. 2004(06)
[4]人基因工程干擾素γ治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的Ⅲ期臨床評(píng)價(jià)[J]. 唐福林,汪國(guó)生,李明佳,董怡.  中國(guó)新藥雜志. 1998(06)
[5]滑膜成纖維細(xì)胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用[J]. 王燎原,戴生明.  中華風(fēng)濕病學(xué)雜志. 2009 (06)

博士論文
[1]干擾素誘導(dǎo)基因IFIT家族分子促進(jìn)Ⅰ型干擾素抗腫瘤作用及其機(jī)制研究[D]. 楊瑩韻.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3610578