目的:探討鉛暴露及IGF1R抑制劑（AG1024）對PC12細胞內(nèi)IGF1R、IGFBP3表達的影響,明確誘發(fā)AD的相關(guān)蛋白的作用機制,是否通過它們的調(diào)節(jié)作用,從而為鉛中毒的預(yù)防和治療提供理論指導(dǎo)。方法:用PC12神經(jīng)元細胞株進行培養(yǎng)建立相應(yīng)的鉛暴露模型,分別用不同濃度的乙酸鉛處理細胞,把實驗分為對照組、1μmol/L PbAc、10μmol/L PbAc組、IGF1R抑制劑（AG1024）組、IGF1R抑制劑組（AG1024）+1μmol/L PbAc組、IGF1R抑制劑組（AG1024）+10μmol/L PbAc組,分別染毒三個時間段24h、48h和72h,MTT法測定鉛暴露劑量對細胞增殖的影響,分別通過western blot技術(shù)和細胞免疫化學法檢測各組PC12細胞中IGF1R,IGFBP3的蛋白表達情況,ELISA法測定細胞上清液中Aβ40、Aβ42表達。MTT結(jié)果顯示,這三個時間段用不同濃度的PbAc處理細胞顯示處理組的OD490值與暴露濃度呈顯著相關(guān)性,暴露濃度越高,吸光度值顯著下降,與對照組相比同一處理時間的組別中,只有低劑量暴露的0.1μmol/L組沒有顯著性差異,其... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學河南省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

體外培養(yǎng)72h的PC12細胞不同鉛暴露濃度的形態(tài)學觀察（10×10）

2 細胞 IGF1R 蛋白表達結(jié)果與分析顯示，與對照組相比，低劑量鉛暴露組（0.1μmol/L）IGF1R 蛋白表達IGF1R 蛋白在 1μM 和 10μM 醋酸鉛組細胞中的表達則明顯低于對照意義，P<0.05，中高濃度鉛暴露顯著抑制了細胞體系中 IGF1R 蛋白的量的升高，該抑制效應(yīng)越明顯。課題組前期體內(nèi)實驗表明，免疫組化法與對照組相比，0.1%、0.5%和 1%PbAc 組在仔鼠海馬中 IGF1R 表達顯實驗結(jié)果一致，表明鉛暴露下調(diào) IGF1R 的表達，在我們的水迷宮實驗比對照組差[113]。在老化過程中神經(jīng)元 IGF1-R 表達的增加與 AD 的發(fā)生上，在腦老化和體外培養(yǎng)的老年神經(jīng)元中，信號通路被激活下游的 IG β 肽(Aβ)的產(chǎn)生增加，其異常積累被認為是 AD 疾病發(fā)展的主要因素[ β-淀粉狀蛋白產(chǎn)生中的 IGF1R 信號傳導(dǎo)可能參與 AD 的發(fā)展。1R 15510μmol/L PbAc 1μmol/L PbAc 0.1μmol/L PbAc 對照組

圖 2 醋酸鉛處理 72h 對 PC12 細胞內(nèi) IGF1R 蛋白相對表達量的變化Fig. 2 changes of relative expression of IGF1R protein in PC12 cells treated with lead acetate for 72注：ANOVA 與對照組比較，*P<0.05，其值代表 IGF1R/β-actin 強度的比值。5.免疫熒光法測定 IGF1R 蛋白在各實驗組的差異表達用免疫熒光分析技術(shù)對 IGF1R 的表達及分布、轉(zhuǎn)移進行了定位，IGF1R 蛋白主要在漿中表達，呈紅色，A 對照組細胞生長良好，神經(jīng)元細胞形態(tài)、樹突完整，B 組出現(xiàn)胞核壞死、突起短的現(xiàn)象，C 組細胞凋亡較嚴重，神經(jīng)元細胞大部分樹突消失，D 抑較 A 組明顯抑制細胞生長，E 組和 F 組表明抑制劑和鉛聯(lián)合組對細胞有不同程度的應(yīng)。圖 3 記錄了 PC12 細胞空白對照組和鉛暴露組 IGF1R 的免疫熒光分析結(jié)果。研究表露組 IGF1R 蛋白活性與空白組 IGF1R 蛋白活性相比，出現(xiàn)了明顯的下降趨勢。1劑量鉛暴露組 IGF1R 免疫熒光抗體的平均光密度和神經(jīng)元活性較對照組顯著降低，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）其中高劑量（10μmol/L）顯著性差異下降趨勢最為明顯，與blot 結(jié)果一致。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3604446