目的:探討鉛暴露及IGF1R抑制劑（AG1024）對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)IGF1R、IGFBP3表達(dá)的影響,明確誘發(fā)AD的相關(guān)蛋白的作用機(jī)制,是否通過(guò)它們的調(diào)節(jié)作用,從而為鉛中毒的預(yù)防和治療提供理論指導(dǎo)。方法:用PC12神經(jīng)元細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)建立相應(yīng)的鉛暴露模型,分別用不同濃度的乙酸鉛處理細(xì)胞,把實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、1μmol/L PbAc、10μmol/L PbAc組、IGF1R抑制劑（AG1024）組、IGF1R抑制劑組（AG1024）+1μmol/L PbAc組、IGF1R抑制劑組（AG1024）+10μmol/L PbAc組,分別染毒三個(gè)時(shí)間段24h、48h和72h,MTT法測(cè)定鉛暴露劑量對(duì)細(xì)胞增殖的影響,分別通過(guò)western blot技術(shù)和細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)各組PC12細(xì)胞中IGF1R,IGFBP3的蛋白表達(dá)情況,ELISA法測(cè)定細(xì)胞上清液中Aβ40、Aβ42表達(dá)。MTT結(jié)果顯示,這三個(gè)時(shí)間段用不同濃度的PbAc處理細(xì)胞顯示處理組的OD490值與暴露濃度呈顯著相關(guān)性,暴露濃度越高,吸光度值顯著下降,與對(duì)照組相比同一處理時(shí)間的組別中,只有低劑量暴露的0.1μmol/L組沒(méi)有顯著性差異,其... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

體外培養(yǎng)72h的PC12細(xì)胞不同鉛暴露濃度的形態(tài)學(xué)觀察（10×10）

2 細(xì)胞 IGF1R 蛋白表達(dá)結(jié)果與分析顯示，與對(duì)照組相比，低劑量鉛暴露組（0.1μmol/L）IGF1R 蛋白表達(dá)IGF1R 蛋白在 1μM 和 10μM 醋酸鉛組細(xì)胞中的表達(dá)則明顯低于對(duì)照意義，P<0.05，中高濃度鉛暴露顯著抑制了細(xì)胞體系中 IGF1R 蛋白的量的升高，該抑制效應(yīng)越明顯。課題組前期體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，免疫組化法與對(duì)照組相比，0.1%、0.5%和 1%PbAc 組在仔鼠海馬中 IGF1R 表達(dá)顯實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，表明鉛暴露下調(diào) IGF1R 的表達(dá)，在我們的水迷宮實(shí)驗(yàn)比對(duì)照組差[113]。在老化過(guò)程中神經(jīng)元 IGF1-R 表達(dá)的增加與 AD 的發(fā)生上，在腦老化和體外培養(yǎng)的老年神經(jīng)元中，信號(hào)通路被激活下游的 IG β 肽(Aβ)的產(chǎn)生增加，其異常積累被認(rèn)為是 AD 疾病發(fā)展的主要因素[ β-淀粉狀蛋白產(chǎn)生中的 IGF1R 信號(hào)傳導(dǎo)可能參與 AD 的發(fā)展。1R 15510μmol/L PbAc 1μmol/L PbAc 0.1μmol/L PbAc 對(duì)照組

圖 2 醋酸鉛處理 72h 對(duì) PC12 細(xì)胞內(nèi) IGF1R 蛋白相對(duì)表達(dá)量的變化Fig. 2 changes of relative expression of IGF1R protein in PC12 cells treated with lead acetate for 72注：ANOVA 與對(duì)照組比較，*P<0.05，其值代表 IGF1R/β-actin 強(qiáng)度的比值。5.免疫熒光法測(cè)定 IGF1R 蛋白在各實(shí)驗(yàn)組的差異表達(dá)用免疫熒光分析技術(shù)對(duì) IGF1R 的表達(dá)及分布、轉(zhuǎn)移進(jìn)行了定位，IGF1R 蛋白主要在漿中表達(dá)，呈紅色，A 對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)、樹(shù)突完整，B 組出現(xiàn)胞核壞死、突起短的現(xiàn)象，C 組細(xì)胞凋亡較嚴(yán)重，神經(jīng)元細(xì)胞大部分樹(shù)突消失，D 抑較 A 組明顯抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，E 組和 F 組表明抑制劑和鉛聯(lián)合組對(duì)細(xì)胞有不同程度的應(yīng)。圖 3 記錄了 PC12 細(xì)胞空白對(duì)照組和鉛暴露組 IGF1R 的免疫熒光分析結(jié)果。研究表露組 IGF1R 蛋白活性與空白組 IGF1R 蛋白活性相比，出現(xiàn)了明顯的下降趨勢(shì)。1劑量鉛暴露組 IGF1R 免疫熒光抗體的平均光密度和神經(jīng)元活性較對(duì)照組顯著降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）其中高劑量（10μmol/L）顯著性差異下降趨勢(shì)最為明顯，與blot 結(jié)果一致。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]橘皮素對(duì)PC-12細(xì)胞Aβ水平的影響及機(jī)制研究[J]. 歐陽(yáng)新平,鄭莉,周壽紅,陸素青,陳歆,張敏,何平平,唐朝克.  中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志. 2017(02)
[2]IGF-1R抑制劑AG1024對(duì)頭頸鱗癌FaDu細(xì)胞放射敏感性的影響[J]. 俞立萍,李萍,章青,徐文才,李兆斌,傅深.  中國(guó)癌癥雜志. 2012(07)
[3]阻斷胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體信號(hào)傳導(dǎo)路徑對(duì)人乳腺癌細(xì)胞放射增敏作用機(jī)制研究[J]. 李萍,章青,李兆斌,徐文才,孫宜,傅深.  中華放射腫瘤學(xué)雜志. 2012 (01)
[4]大蒜素對(duì)人胃癌SGC7901細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J]. 劉超俠,孔慶兗.  徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2010(09)
[5]胰島素樣生長(zhǎng)因子-1神經(jīng)保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J]. 劉薇,張祥建.  中國(guó)卒中雜志. 2008(08)
[6]胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3[J]. 漆正堂.  生命的化學(xué). 2003(02)
[7]胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體激活機(jī)制及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)特異性[J]. 劉寶英,王會(huì)信.  生理科學(xué)進(jìn)展. 1998(03)
[8]粉碎機(jī)涂漆引起食品高鉛污染探討[J]. 劉延江,姚為民,袁浩.  中國(guó)衛(wèi)生監(jiān)督雜志. 1995(04)

博士論文
[1]鉛致阿爾茨海默癥樣變神經(jīng)毒性及對(duì)相關(guān)通路蛋白表達(dá)的影響[D]. 李星.鄭州大學(xué) 2017
[2]生命早期鉛暴露在阿爾茨海默病樣變進(jìn)程中的作用及分子機(jī)制[D]. 劉芳麗.鄭州大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3604446