紅茶是全球消費(fèi)量最大的茶類,茶黃素是紅茶中多酚氧化聚合形成的一類具有苯駢卓酚酮結(jié)構(gòu)化合物的總稱,在體內(nèi)外具有多種生物學(xué)功能。本研究采用軟脂酸（PA）誘導(dǎo)的胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型,以及高脂飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的2型糖尿病C57BL/6小鼠模型,研究了茶黃素對(duì)高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗的作用及相關(guān)機(jī)制,進(jìn)而采用轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序技術(shù),分析了茶黃素對(duì)糖尿病小鼠肝臟的分子信號(hào)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。主要研究結(jié)果如下:1.采用Western Blot法分析證實(shí),茶黃素通過上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT4的蛋白表達(dá),增加Akt在Ser473的磷酸化水平和減少IRS-1在Ser307的磷酸化來水平,顯著增加胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的葡萄糖攝取。此外,通過熒光定量PCR法,茶黃素增加了線粒體DNA的相對(duì)含量,下調(diào)PGC-1βmRNA水平并增加PRC mRNA水平。Mdivi-1是一種選擇性的線粒體分裂抑制劑,可以減弱TFs誘導(dǎo)的胰島素抵抗HepG2細(xì)胞攝取葡萄糖的促進(jìn)作用。這些結(jié)果表明茶黃素可以改善由PA誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞胰島素抵抗,至少部分地通過促進(jìn)線粒體的生物合成的途徑。2.在高脂聯(lián)合STZ誘導(dǎo)2型糖尿病模型... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

四種主要茶黃素的結(jié)構(gòu)圖

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章緒論8以125mg/kg劑量注射STZ，繼續(xù)喂養(yǎng)4周后成模。喂養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)小鼠的血糖升高緩慢，體重、攝食量與飲水量與對(duì)照組無顯著差異，直至造模結(jié)束后表現(xiàn)為高血糖，代謝變化過程緩慢，能較好的模擬人2型糖尿病的形成。1.5研究內(nèi)容及技術(shù)路線目前關(guān)于紅茶改善胰島素抗性的研究較少，在鏈脲霉素結(jié)合高脂誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型中，紅茶和綠茶提取物均能降低血糖，改善葡萄糖耐受不良，但紅茶提取物顯著提高血清胰島素水平，而綠茶不能，表明紅茶和綠茶改善胰島素抵抗的作用機(jī)理不同[53]。上述研究均采用紅茶茶湯或提取物進(jìn)行研究，未能排除樣品中兒茶素等多酚類物質(zhì)和咖啡因的干擾�；谏鲜鰧�(shí)驗(yàn)結(jié)果，本論文擬采用軟脂酸PA誘導(dǎo)的人HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型和高脂與鏈脲霉素聯(lián)合誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型，以高純度的茶黃素TFs為供試樣品，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)，從動(dòng)物、細(xì)胞以及分子水平研究茶黃素對(duì)線粒體生物合成和功能以及胰島素抗性的作用和機(jī)制。圖1.2研究技術(shù)路線圖Fig1.2Theresearchroadmapofthepresentstudy

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章茶黃素在HepG2細(xì)胞模型中通過線粒體途徑改善軟脂酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗14封閉：棄蒸餾水，加入含5%脫脂奶粉的TBST封閉液約10mL，室溫?fù)u床孵育1h。一抗孵育：按說明書用稀釋液稀釋一抗，置于4oC孵育2h。在搖床上用TBST漂洗NC膜30min，每十分鐘換一次TBST液，除去多余一抗。二抗孵育：棄TBST液，加入用稀釋液稀釋的二抗10mL，室溫?fù)u床孵育2h。在搖床上用TBST漂洗NC膜30min，每十分鐘換一次TBST液，除去多余二抗。ECL法顯影：加入新鮮配制的化學(xué)發(fā)光液，搖床孵育5min后用凝膠成像分析系統(tǒng)成像、拍照、分析。GAPDH為本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參蛋白。2.2.2.10統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差（mean±SD）表示，使用GraphPadPrism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Origin軟件作圖。采用單因素方差分析（ANOVA）、Dunnett’s多重檢驗(yàn)法分析顯著性差異，p<0.05時(shí)判定有顯著差異性。2.3結(jié)果與分析2.3.1茶黃素含量的分析和鑒定HPLC分析結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)中所用的TFs分別為12.0%TF、18.1%TF2A、24.1%TF2B和38.49%TF3。四種茶黃素單體的總含量為92.8%(圖2.1)。圖2.1茶黃素的HPLC色譜分析。1，茶黃素(TF)：R1=R2=H；2，茶黃素-3-沒食子酸酯(TF2A)：R1=H，R2=galloyl；3，茶黃素-3′-沒食子酸酯(TF2B)：R1=galloyl，R2=H；4.茶黃素-3，3′-丁二酸(TF3)：R1=R2=galloyl。Figure2.1HPLCchromatogramoftheaflavins(TFs).1,Theaflavin(TF):R1=R2=H;2,Theaflavin-3-gallate(TF2A):R1=H,R2=galloyl;3,Theaflavin-3′-gallate(TF2B):R1=galloyl,R2=H;4.Theaflavins-3,3′-digallate(TF3):

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]從腸道黏膜屏障與免疫系統(tǒng)探討小檗堿改善糖脂代謝紊亂的機(jī)制[D]. 鞏靜.華中科技大學(xué) 2018
[2]茶黃素的UPLC分析及其對(duì)人卵巢癌細(xì)胞抑制作用和機(jī)制的研究[D]. 潘海波.浙江大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3574436