目的:本實(shí)驗(yàn)旨在探討脂肪細(xì)胞對破骨細(xì)胞分化及其功能活性的影響,解析其可能的分子機(jī)制。方法:ST2小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)21天,分化后的ST2-脂肪細(xì)胞于無血清α-MEM中培養(yǎng)14小時(shí)后收集其培養(yǎng)上清。收集后的脂肪細(xì)胞培養(yǎng)上清與α-MEM以1:1比例混合制成脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基（ADIPO CM）,ELISA檢測ADIPO CM中趨化因子CXCL12含量。Cell Counting Kit-8（CCK-8）實(shí)驗(yàn)分析CXCL12對單核巨噬細(xì)胞（RAW264.7）和骨髓巨噬細(xì)胞（BMMs）增殖活性的影響。將RAW264.7細(xì)胞接種于含有RANKL的培養(yǎng)基,BMMs接種于含有RANKL和M-CSF的培養(yǎng)基中,行破骨細(xì)胞分化誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)培養(yǎng)基中加入或不加入CXCL12、AMD3100,將破骨細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)分為4組:對照組（CONTROL）、脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基組（ADIPO CM）、CXCL12組和AMD3100組,培養(yǎng)第4天進(jìn)行TRAP染色并計(jì)數(shù)TRAP陽性的多核破骨細(xì)胞。在培養(yǎng)第7天,進(jìn)行van kossa染色并分析破骨細(xì)胞功能活性。q RT-PCR及Western blot分別檢測破骨細(xì)胞N... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ST2細(xì)胞成脂誘導(dǎo)前后油紅O染色

36 2. 脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基（ADIPO CM）促進(jìn)破骨細(xì)胞分化。A：RAW264.7 細(xì)胞分別于普通基（CONTROL）和脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基（ADIPO CM）中行破骨細(xì)胞誘導(dǎo) 4 天后的 TRAP。B：BMMs 分別于普通培養(yǎng)基（CONTROL）和脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基（ADIPO CM）中行破胞誘導(dǎo) 4 天后的 TRAP 染色。C：TRAP 陽性破骨細(xì)胞數(shù)量。D：破骨細(xì)胞面積。紅色箭頭為形成的破骨細(xì)胞。與對照組相比*p＜0.05；**p＜0.01。

3. 脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基（ADIPO CM）促進(jìn)破骨細(xì)胞骨吸收功能。A：RAW2647 細(xì)胞分別通培養(yǎng)基（CONTROL）和脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基（ADIPO CM）中行破骨細(xì)胞誘導(dǎo) 7 天后的 ossa 染色。B：BMMs 分別于普通培養(yǎng)基（CONTROL）和脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基（ADIPO C行破骨細(xì)胞誘導(dǎo) 7 天后的 Von Kossa 染色。C：破骨細(xì)胞骨吸收面積所占比例。黑色箭頭為收區(qū)域。**p＜0.01。圖 4.ADIPO CM 和α-MEM(CONTROL)中 CXCL12 含量。**p<0.01


本文編號：3571948