背景:糖尿病已經(jīng)成為威脅全球人類健康的非傳染性疾病之一,根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)道,高血糖在全球范圍內(nèi),成為繼煙草及高血壓之后,第三致死的威脅因素。據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟的最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),2016年全球已有約4.15億18歲以上糖尿病患者,據(jù)估計(jì),18歲以上糖尿病患者將在2040年增加至6.42億人。1型糖尿病僅占糖尿病的10%至15%,它是一種Th1介導(dǎo)的自身免疫性疾病,主要表現(xiàn)為抗原特異性T細(xì)胞選擇性破壞產(chǎn)生胰島素的胰腺?細(xì)胞。而白介素10（Interleukin-10,IL-10）作為一種有效的抗炎細(xì)胞因子,是Th1型免疫反應(yīng)的強(qiáng)抑制劑�；虬邢蚱茐膬�(nèi)源性IL-10使機(jī)體對原本非病原性的炎癥刺激極為敏感,并放大了Th1介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。因此預(yù)期當(dāng)機(jī)體缺乏IL-10時(shí)可能會發(fā)展為自身免疫性糖尿病,雖然已有研究表明IL-10缺乏的NOD（非肥胖糖尿�。┬∈笾凶园l(fā)性糖尿病的發(fā)生率與對照的NOD小鼠相似,但是當(dāng)非NOD小鼠缺乏IL-10時(shí)是否會發(fā)展為自身免疫性糖尿病還是未知的。目的:本研究希望通過利用IL-10基因敲除小鼠,探究IL-10缺乏是否是1型糖尿病的發(fā)病機(jī)制之一,并且進(jìn)一步探究IL-10的缺... 

【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

型糖尿病中，細(xì)胞損傷與各類免疫細(xì)胞的關(guān)系

電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文12（9）棄上清，沉淀加入4ml1.1-Ficoll充分重懸并轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，然后依次加入2ml1.096-Ficoll以及2ml1.066-Ficoll，加入時(shí)要盡量緩慢，注意液面分層。將該15ml離心管放入離心機(jī)，以升速1，降速0，速度2000rpm，室溫離心20分鐘。（10）離心結(jié)束后，用巴氏吸管將中間白色胰島層吸出，并加入含有10%胎牛血清DMEM的培養(yǎng)皿中，在冰上畫圈搖晃培養(yǎng)皿，中間聚集的圓形顆粒即為胰島細(xì)胞，在顯微鏡下可觀察到圓形細(xì)胞團(tuán)（如圖2-1（b）所示）。(a)（b）圖2-1小鼠胰島細(xì)胞的分離。（a）充盈的胰腺組織;（b）在顯微鏡下觀察的分離的胰島細(xì)胞2.2.4實(shí)時(shí)熒光定量PCR2.2.4.1提取樣本總RNA以下操作都置于冰上操作：（1）將分離的胰島細(xì)胞轉(zhuǎn)移至無RNA酶的EP管中，加入1mlTrizol，用移液槍反復(fù)吹打，使Trizol與胰島細(xì)胞充分作用。（2）加入200ml氯仿，渦旋混勻后室溫放置，待有明確分層液面時(shí)，放入4℃離心機(jī)，離心15分鐘。（3）吸取上清液于新的無RNA酶EP管中，加入等體積已提前預(yù)冷的異丙醇，渦旋顛倒混勻，-20℃冰箱中放置30分鐘。（4）4攝氏度離心10分鐘后棄去上清，加入1ml無水乙醇后輕彈EP管進(jìn)行漂洗。（5）4攝氏度離心10分鐘后棄去上清，加入1ml75%乙醇后輕彈EP管進(jìn)行漂洗。

電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文18（a）（b）（c）（d）圖3-1IL-10敲除小鼠基因鑒定。（a）IL-10-/-小鼠基因構(gòu)建示意圖；（b）引物設(shè)計(jì)示意圖；（c)小鼠基因型鑒定的瓊脂糖電泳示意圖；（d）實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，KO小鼠與WT小鼠相比IL-10表達(dá)顯著性降低，****P＜0.0001，ns表示無顯著差異3.2IL-10基因敲除對小鼠基本體征的影響3.2.1IL-10基因敲除對小鼠體重的影響小鼠出生4周后每隔2天測量一次小鼠體重，分為WT、Het、KO組，每組測量小鼠20只。結(jié)果見圖3-2（a），在小鼠出生6周左右時(shí)，WT和KO小鼠的體重已經(jīng)有了顯著性差異差異，這一結(jié)果與上文提到的IL-10-/-小鼠會在出生后8-10周自發(fā)發(fā)展為結(jié)腸炎的結(jié)果一致[12]，因?yàn)榻Y(jié)腸炎的主要臨床病理特征之一就是體重下降。同時(shí)，Het小鼠與WT體重變化情況基本一致。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Elusive liver factor that causes pancreatic α cell hyperplasia: A review of literature[J]. Run Yu,Yun Zheng,Matthew B Lucas,Yun-Guang Tong.  World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2015(04)
[2]Pathologic pancreatic endocrine cell hyperplasia[J]. Debra Ouyang,Deepti Dhall.  World Journal of Gastroenterology. 2011(02)



本文編號：3547104