背景:在骨發(fā)育、生長(zhǎng)、修復(fù)、重建過(guò)程中,破骨細(xì)胞（Osteoclast）作為骨吸收的主要功能細(xì)胞,發(fā)揮著重要的作用。破骨細(xì)胞起源于血系單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng),是一種特殊的終末分化細(xì)胞,由其單核前體細(xì)胞通過(guò)多種方式融合形成巨大的多核細(xì)胞。破骨細(xì)胞前體分化為成熟的破骨細(xì)胞主要依賴于腫瘤壞死因子家族的核因子κB受體激活蛋白配體（RANKL）和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）的作用。RANKL大量表達(dá)于成骨細(xì)胞,骨基質(zhì)細(xì)胞,T和B淋巴細(xì)胞,并可以激活破骨細(xì)胞受體 RANK。在 RANKL 刺激后,NF-κB、MAPK（JNK、p38、ERK）、Src/PI3K/AKT和NFAT等信號(hào)通路被激活,繼而促進(jìn)破骨細(xì)胞分化相關(guān)的特異性基因表達(dá),促使細(xì)胞分化成具有骨吸收功能的成熟破骨細(xì)胞,從而開始骨的重吸收。生理?xiàng)l件下,破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收與成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成之間保持平衡狀態(tài),以維持正常骨量。如果這種平衡被打破就會(huì)發(fā)生如腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起的局灶性骨溶解,骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis）或者骨硬化等疾病。乳腺癌是最易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的腫瘤之一。乳腺癌轉(zhuǎn)移到骨后,能分泌或者刺激其他細(xì)胞分泌相關(guān)因子,刺激破骨細(xì)胞... 

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圖１－１ＡＲＲＹ－６１４對(duì)ＢＭＭｓ細(xì)胞的毒性作用

ＡＲＲＹ－６１４去處理細(xì)胞，同時(shí)使用ＲＡＮＫＬ誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化，觀察ＡＲＲＹ－６１４對(duì)??破骨細(xì)胞分化的影響。ＴＲＡＰ染色后發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組中有大片破骨細(xì)胞形成，而處理??組中，隨著藥物濃度的增加，破骨細(xì)胞生成減少，破骨細(xì)胞的面積也更�。▓D１－２Ａ）。??統(tǒng)計(jì)ＴＲＡＰ陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)后發(fā)現(xiàn)，ＡＲＲＹ－６１４處理組和對(duì)照組中ＴＲＡＰ陽(yáng)性細(xì)胞??數(shù)量具有明顯差異（圖１－２Ｂ）。??Ａ?Ｂ??ＡＲＲＹ６１４?１，００，????Ｅ??Ｃｏｎｔｒｏ?０．１?｜ｉＭ?０．２＾Ｍ?０．４，ｉＭ?ｆ?３〇ｏ－?＊??ｒ：Ｂ?ＩＩｑ??辦．辦．??圖１－２不同濃度的ＡＲＲＹ－６１４處理對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響。（Ａ）顯微鏡下代??表性ＴＲＡＰ陽(yáng)性細(xì)胞圖片；（Ｂ）統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。＊＊ｐ＜?０．０１。??為了進(jìn)一步研究ＡＲＲＹ－６１４對(duì)破骨細(xì)胞分化不同階段的影響，我們分別將??ＡＲＲＹ－６１４在破骨細(xì)胞分化的不同階段加入觀察對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響。ＴＲＡＰ染??色后發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組中有大片破骨細(xì)胞形成，而處理組中，在１－３天加入ＡＲＲＹ－６１４??的處理組中，破骨細(xì)胞生成最少，破骨細(xì)胞的面積也最�。▓D２－２Ａ）。統(tǒng)計(jì)ＴＲＡＰ??陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)后發(fā)現(xiàn)，１－３天加入ＡＲＲＹ－６１４的處理組和對(duì)照組中ＴＲＡＰ陽(yáng)性細(xì)??胞數(shù)量差異最明顯（圖２－２Ｂ）。??１１??

為了進(jìn)一步研究ＡＲＲＹ－６１４對(duì)破骨細(xì)胞功能的影響，我們首先測(cè)試了??ＡＲＲＹ－６１４對(duì)破骨細(xì)胞肌動(dòng)蛋白環(huán)形成的影響，因?yàn)槠乒羌?xì)胞肌動(dòng)蛋白環(huán)形成破骨??細(xì)胞發(fā)揮骨吸收的必要條件。如圖２－２Ａ所示，在對(duì)照組中觀察到明顯的肌動(dòng)蛋白??環(huán)的形成，而在ＡＲＲＹ－６１４處理中則很少有肌動(dòng)蛋白環(huán)形成。統(tǒng)計(jì)肌動(dòng)蛋白環(huán)數(shù)??量后發(fā)現(xiàn)，ＡＲＲＹ－６１４處理導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白環(huán)的數(shù)量以一種劑量依賴性的方式減少??（圖２－２Ｂ），這表明ＡＲＲＹ－６１４處理組中形成了破骨細(xì)胞在功能上是有缺陷的。??Ａ?Ｂ??Ｃｔｒｌ?０．１?ｊｉＭ??■■??｜?０．２ＨＭ?０．４ＭＭ?１?■－??ｉ?朋?ｍ?ｎ?ｈ??！?ｆ；?Ｚ?Ｃｔｒｌ?０．１ｍＭ?０．２ｍＭ?０．４ｐＭ??圖２－１?ＡＲＲＹ－６１４對(duì)破骨細(xì)胞肌動(dòng)蛋白環(huán)形成的影響。（Ａ）顯微鏡下代表性細(xì)胞??肌動(dòng)蛋白環(huán)細(xì)胞圖片；（Ｂ）統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。＊＊ｐ＜０．０１。??１２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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