目的:本研究通過構(gòu)建質(zhì)粒特異性的表達類泛素化修飾物（Small ubiquitin-related modifiers,SUMO）,并初步研究SUMO蛋白在原發(fā)性膽汁性膽管炎（Primary biliary cholangitis,PBC）,系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus,SLE）,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis,RA）,干燥綜合征（Sjogren syndrome,SS）多種典型性自身免疫性疾病患者血清中的表達水平,探究抗SUMO抗體是否可作為PBC的特異性血清標(biāo)志物。并結(jié)合患者臨床病歷資料,探究SUMO與可溶性酸性磷酸化核蛋白（Acid soluble phosphorylated nuclear protein,Sp100）間的內(nèi)在聯(lián)系及對患者肝功能的影響。方法:1.利用PCR和ET克隆技術(shù)制備含有SUM01,SUM02,SUM03片段的質(zhì)粒,將其分別導(dǎo)入大腸桿菌進行蛋白的誘導(dǎo)和表達,最后進行蛋白的純化。2.采用斑點印跡法初步篩查原發(fā)性膽汁性膽管炎（PBC）患者血清樣本中的SUMO陽性標(biāo)本,并用Western b... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２?ＳＵＭＯ化修飾途徑［２２］??

目的蛋白以可溶性形式存在于破菌液的上清后，進行蛋白的大量表達與純化。通過條件的??不斷優(yōu)化與改進，獲得條帶單一、純度較高的目的蛋白，以供后續(xù)實驗使用。三種蛋白亞??型純化結(jié)果如圖３．１所示。??Ｍ?ＳＵＭ０１?ＳＵＩＩ０２?ＳＵＭ０３?Ｍ??＝?Ｓ??４０ｋＤ?—??３５ｋＢ?一一??２５ｋＤ?一－一??ｍｍ?ｗ??�。担耄�?一?一??１０ｋＤ??圖３．１三種ＳＵＭＯ蛋白亞型的純化結(jié)果??注：圖中Ｍ代表蛋白Ｍａｒｋｅｒ，目的蛋白在１７ｋＤ－１８ｋＤ左右。??３．２構(gòu)建抗ＳＵＭＯ抗體ＥＬＩＳＡ的診斷體系??３．２．１獲取抗ＳＵＭＯ抗體陽性樣本??（１）采用斑點印跡法對３１９例ＰＢＣ患者樣本進行抗ＳＵＭＯ抗體陽性的初步篩查。部??分結(jié)果如圖３．２．１．１示。（納入本實驗ＰＢＣ樣本血清ＡＭＡ－Ｍ２均為陽性）??

目的蛋白以可溶性形式存在于破菌液的上清后，進行蛋白的大量表達與純化。通過條件的??不斷優(yōu)化與改進，獲得條帶單一、純度較高的目的蛋白，以供后續(xù)實驗使用。三種蛋白亞??型純化結(jié)果如圖３．１所示。??Ｍ?ＳＵＭ０１?ＳＵＩＩ０２?ＳＵＭ０３?Ｍ??＝?Ｓ??４０ｋＤ?—??３５ｋＢ?一一??２５ｋＤ?一－一??ｍｍ?ｗ??�。担耄�?一?一??１０ｋＤ??圖３．１三種ＳＵＭＯ蛋白亞型的純化結(jié)果??注：圖中Ｍ代表蛋白Ｍａｒｋｅｒ，目的蛋白在１７ｋＤ－１８ｋＤ左右。??３．２構(gòu)建抗ＳＵＭＯ抗體ＥＬＩＳＡ的診斷體系??３．２．１獲取抗ＳＵＭＯ抗體陽性樣本??（１）采用斑點印跡法對３１９例ＰＢＣ患者樣本進行抗ＳＵＭＯ抗體陽性的初步篩查。部??分結(jié)果如圖３．２．１．１示。（納入本實驗ＰＢＣ樣本血清ＡＭＡ－Ｍ２均為陽性）??


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