目的:探討不同濃度白藜蘆醇對(duì)RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的影響并觀察自噬在其中的變化及作用。方法:1.CCK-8檢測(cè)不同濃度白藜蘆醇（Resveratrol,RSV）對(duì)RAW264.7細(xì)胞及加入誘導(dǎo)劑RANKL向破骨細(xì)胞分化過程中各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖的影響。2.誘導(dǎo)分化中加入不同濃度RSV,通過TRAP染色觀察破骨細(xì)胞分化的程度;RT-PCR檢測(cè)破骨相關(guān)標(biāo)記物CTSK,MMP9,TRAP和自噬相關(guān)標(biāo)記物L(fēng)C3、Beclin-1、P62的mRNA表達(dá)情況;Western Blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3II/I、Beclin-1、P62的表達(dá)情況;3.選擇適宜濃度的RSV,并加入自噬抑制劑3-甲基嘌呤（3-Methyladenin,3-MA）分別檢測(cè)破骨和自噬相關(guān)標(biāo)記物mRNA及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,RSV在0-1μmol/L范圍干預(yù)12h對(duì)RAW264.7細(xì)胞的增殖無(wú)顯著差異,隨RSV濃度增加和干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng),RAW264.7細(xì)胞增殖逐漸下降。與不處理組相比,加入RANKL均能促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖;RANKL誘導(dǎo)分化時(shí)同時(shí)加入0.1—10μmol/L的RS... 

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【部分圖文】：

不同濃度白藜蘆醇對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖的影響

0.1 101.196±0.725 99.177±0.747 98.208±1.154 97.610±0.477*0.5 99.565±0.959 98.245±1.015* 96.922±0.799* 96.003±0.671*1 98.266±1.021 96.709±0.905* 95.612±0.537* 94.196±0.491*5 97.608±0.725* 95.837±0.614* 94.410±0.610* 93.694±0.656*10 97.667±0.496* 95.321±1.002* 93.091±0.710* 92.288±1.247*注：RAW264.7 細(xì)胞分別加入 0、0.1、0.5、1、5、10μΜ 的 RSV，干預(yù) 12、24、48、72h 時(shí)細(xì)胞的相對(duì)增殖。與不處理組比較* P<0.053.1.2 RANKL 及白藜蘆醇對(duì) RAW264.7 細(xì)胞增殖的影響如圖 3-2 及表 3-2 所示：與不處理組相比，加入 50ng/mL 誘導(dǎo)劑 RANKL 均能促進(jìn) RAW264.7 細(xì)胞的增殖（P<0.05）；在 RANKL 誘導(dǎo)分化時(shí)同時(shí)加入不同濃度白藜蘆醇（0.1、0.5、1、5、10μmol/L），細(xì)胞增殖先上升后逐漸下降，在0.5μmol/L 時(shí)細(xì)胞增殖最大。

23圖 3-3 不同濃度白藜蘆醇對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響（20 10）：50ng/mL 的 RANKL 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化過程中，加入 0、0.1、0.510μΜ 的 RSV，于培養(yǎng)第 5 天 TRAP 染色，通過 Image-Pro Plus 軟件對(duì) TRAP 染色陽(yáng)域進(jìn)行分析，計(jì)算 TRAP 染色陽(yáng)性破骨細(xì)胞相對(duì)區(qū)域的百分比。與 RANKL 組比較*P<.3 白藜蘆醇對(duì)破骨相關(guān)標(biāo)記物 mRNA 表達(dá)的影響如圖 3-4 和表 3-4 所示：與不處理組相比，加入 50ng/mL 誘導(dǎo)劑 RANKL促進(jìn)破骨相關(guān)標(biāo)記物 CTSK，MMP9，TRAP 的 mRNA 的表達(dá)。RANKL 誘化過程中同時(shí)加入不同濃度白藜蘆醇干預(yù)，白藜蘆醇濃度在 0.1μmol/L

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]FoxO1介導(dǎo)白藜蘆醇、葛根素抑制破骨細(xì)胞生成和活性的機(jī)制研究[D]. 馮燕陵.蘭州大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3506390