目的:骨骼肌是人體最大的攝取餐后葡萄糖的組織,胰島素促進(jìn)骨骼肌攝取葡萄糖障礙在2型糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用,非胰島素依賴方式促進(jìn)骨骼肌攝取葡萄糖可有效預(yù)防和治療2型糖尿病。運(yùn)動或AMPK激活劑AICAR均通過AMPK促進(jìn)骨骼肌攝取葡萄糖,此外,Rac1也參與運(yùn)動調(diào)節(jié)骨骼肌葡萄糖攝取的作用。本課題組前期工作發(fā)現(xiàn)AICAR激活C2C12小鼠骨骼肌細(xì)胞Rac1,Rac1抑制劑Rac1 inhibitor II顯著抑制AICAR促進(jìn)的GLUT4轉(zhuǎn)位,提示Rac1可能介導(dǎo)AICAR的作用。Rac是小G蛋白,其活化由Rac鳥苷交換因子（Rac-GEFs）調(diào)節(jié),Tiam1和VAV2均可作為Rac-GEF激活Rac1,本研究探討Tiam1和VAV2是否介導(dǎo)AICAR激活Rac1,促進(jìn)骨骼肌細(xì)胞攝取葡萄糖的作用。內(nèi)容:第一部分,應(yīng)用AICAR孵育C2C12肌管細(xì)胞,Western blot檢測Rac-GEF Tiam1和VAV2的蛋白及磷酸化水平。第二部分,應(yīng)用藥物抑制劑、腺病毒以及siRNA,上調(diào)或者下調(diào)AMPK或Tiam1,探討AMPK與Tiam1的上下游關(guān)系:1.感染激活型AMPK腺病毒（A... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Westernblot檢測C2C12肌管細(xì)胞中Tiam1和VAV2

細(xì)胞不同時間，Western blomean±SE 表示，**** p<0.0胞 VAV2 蛋白酪氨酸磷酸化水平，但有研究表明 VAV AICAR 是否影響 C2C12 肌細(xì)胞無血清培基培養(yǎng)2 h，抗體，陰性對照則加入 IgG結(jié)果如圖 2 所示，陰性對照AV2 蛋白酪氨酸磷酸化沒 的磷酸化，VAV2 并不參與lgG Bas AICyr2

stern blot 檢測激活型 AMPK 腺病毒感效率光蛋白的激活型 AMPK 腺病毒感染 C光蛋白的表達(dá)，Western blot 檢測激活平。病毒感染 C2C12 細(xì)胞對 Tiam1 的影響毒劑量和時間感染 C2C12 成肌細(xì)胞，病毒為陰性對照。熒光顯微鏡觀察綠腺病毒是否感染成功。提取細(xì)胞蛋白如圖 4 所示，在 C2C12 成肌細(xì)胞中感色熒光蛋白的表達(dá)。Western blot 檢測（p<0.01），為對照組的 1.86±0.22 倍


本文編號：3494533