發(fā)布時(shí)間：2021-11-08 03:05

　　血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）通路在調(diào)節(jié)脂肪組織的分化及能量代謝過(guò)程、促進(jìn)血管新生和增加血管通透性、促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)及遷移等方面具有重要作用。在VEGFA的亞型中,VEGFA₁₆₄體現(xiàn)了VEGFA多數(shù)的生物功能。目前,多是用aP2基因啟動(dòng)子構(gòu)建的脂肪組織特異性敲除或過(guò)表達(dá)小鼠模型,但aP2基因也在肌肉和巨噬細(xì)胞中表達(dá)。與aP2啟動(dòng)子相比,adiponectin啟動(dòng)子在脂肪組織中表達(dá)的特異性更好。因此,以adiponectin基因?yàn)閱?dòng)子構(gòu)建的脂肪組織特異轉(zhuǎn)基因小鼠可以更加直觀地研究脂肪組織特異性表達(dá)VEGF與脂肪分化和能量代謝之間的聯(lián)系。本論文采用分子克隆的方式,以基因組DNA為模板擴(kuò)增出目的基因序列,以帶啟動(dòng)子序列的質(zhì)粒小提產(chǎn)物為模板擴(kuò)增啟動(dòng)子,將脂肪組織特異性的adiponectin基因啟動(dòng)子與改造過(guò)的目的基因表達(dá)載體pEGFP-N1連接,成功構(gòu)建了脂肪組織特異性VEGA₁₆₄過(guò)表達(dá)載體。并利用顯微注射技術(shù),成功培育出鑒定為陽(yáng)性Founder小鼠及其F1代小鼠。研究證實(shí),轉(zhuǎn)染過(guò)的脂肪細(xì)胞VEGF表達(dá)量升高而VEGFB的mRNA表達(dá)量下降... 

【文章來(lái)源】：東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

白色脂肪棕色化機(jī)制[9]

東北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文4圖2人和小鼠的脂聯(lián)素基因啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)示意圖[34]3.3脂聯(lián)素的功能脂聯(lián)素具有緩和炎癥的能力，可能是通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，脂聯(lián)素受體表現(xiàn)出神經(jīng)酰胺酶活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的，目前可視為是引發(fā)部分肥胖相關(guān)代謝性疾病的主要因素。有研究顯示它的濃度在體內(nèi)呈下降趨勢(shì)，這一表現(xiàn)與其他脂肪因子相反，相比傳統(tǒng)的抗高血壓治療，在胰島素抵抗的治療中顯示出額外的優(yōu)勢(shì)。脂聯(lián)素促進(jìn)脂肪酸氧化。AdipoR1/AdipoR2作為脂聯(lián)素結(jié)合蛋白，CK2A、PPL1和LKB1等作為上游因子在肝細(xì)胞，肌肉組織中激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)有關(guān)信號(hào)途徑。乙酰輔酶A羧化酶(ACC)和過(guò)氧化物酶體增物激活受體α(PPARα)是AMPK信號(hào)途徑的下游因子，共同參與脂聯(lián)素增強(qiáng)脂肪酸氧化的過(guò)程[36]。信號(hào)途徑上下游關(guān)系如下所示：1)AdipoR1/2-AMPK-ACC2)AdipoR1/2-AMPK-PPARα3)AdipoR1/2-沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）-AMPK脂聯(lián)素抑制脂肪形成。在小鼠實(shí)驗(yàn)中，注射脂聯(lián)素會(huì)顯著抑制脂肪的合成，從而顯著降低血漿中血脂含量[37]。這一過(guò)程由肝激酶B1（LKB1），過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體輔助活化因子1α（PGC-1α），固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c），鈣調(diào)素依賴蛋白激酶（CAMK）等因子參與這一通路的調(diào)控，相關(guān)信號(hào)途徑上下游關(guān)系如下：1)AdipoR1-LKB1-AMPK-SREBP-1c2)AdipoR1-CaMKK-AMPK-SIRTI-PGC-1α3)AdipoR2—PPARα

東北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文54.1VEGFs家族發(fā)現(xiàn)史血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子最先由牛垂體的腺泡中提取出[38]。因其促血管生成生物活性高，被命名為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)[39]。亦稱作血管通透性因子(VPF)[40]。VEGFs家族包括VEGFA,VEGFB,VEGFC,VEGFD和PIGF,相關(guān)受體包括（血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子1型受體（VEGF-receptor1，VEGFR1），VEGFR2,VEGFR3,神經(jīng)纖毛蛋白1(neuropilin-1,NRP-1)和NRP-2[41-44]，它們的關(guān)系網(wǎng)如(圖3)所示。其中，VEGFR1和NRP-1都可以作為VEGF和VEGFB的受體發(fā)揮功能，且相比于VEGFR2，VEGF與VEGFR1結(jié)合活性更高，相當(dāng)于是VEGFR2的結(jié)合能力的11倍，但是血管生成的主途徑是通過(guò)VEGF與VEGFR2結(jié)合實(shí)現(xiàn)的[45]。圖3VEGFs家族成員及受體[46]4.2VEGFAVEGFA全長(zhǎng)為14kb，共有兩個(gè)亞基，的亞基相對(duì)分子量介于18000-24000之間，每個(gè)亞基由兩個(gè)相同的多肽鏈構(gòu)成，通過(guò)二硫鍵結(jié)合，因此該功能性糖蛋白的相對(duì)分子量介于34000-46000之間，也是一種外分泌蛋白[47]，其基因結(jié)構(gòu)和前體mRNA的組成如圖所示（圖4）：圖4VEGF基因和VEGF前體mRNA[46]VEGFA主要分為四種同分異構(gòu)體：VEGFA189，VEGFA121，VEGFA165，及VEGFA206[48]。其中VEGF165丟失exon6編碼區(qū)，還有exon1，exon2，exon3，exon4，exon5，exon7，exon87個(gè)外顯子編碼區(qū)，但是是最重要的亞型，多數(shù)功能由這一亞型4VEGFs家族及其受體

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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