miRNAs是一種非編碼的小RNA,通過靶向mRNA的3′UTR調控基因的轉錄后翻譯。為明確miR-324-5p對棕櫚酸誘導的3T3-L1脂肪細胞凋亡的作用和機制,體外培養(yǎng)3T3-L1脂肪細胞,利用棕櫚酸誘導細胞凋亡的同時過表達或抑制miR-324-5p,通過Annexin-V/FITC染色、RT-qPCR等方法檢測miR-324-5p對3T3-L1脂肪細胞凋亡的作用。通過在線軟件預測miR-324-5p的靶基因并進行驗證。結果顯示,過表達miR-324-5p能夠顯著抑制凋亡相關基因BCL-2相關X蛋白（BCL2-associated X protein, Bax）和胱天蛋白酶3（caspase3）的表達水平（P<0.05）;而抑制miR-324-5p后能夠顯著促進這些基因的表達（P<0.05）;靶基因預測及驗證結果表明,miR-324-5p能夠顯著降低淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein, APP）的表達水平（P<0.05）。本研究認為,miR-324-5p可能通過靶定APP抑制棕櫚酸誘導的3T3-L1脂肪細胞凋亡。 

【文章來源】：中國生物化學與分子生物學報. 2020,36(08)北大核心CSCD

【文章頁數】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 細胞培養(yǎng)
    1.3 細胞轉染
    1.4 細胞誘導凋亡
    1.5 細胞凋亡檢測
    1.6 RNA提取和實時熒光定量 PCR(RT-qPCR)
    1.7 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 構建3T3-L1前體脂肪細胞凋亡模型
    2.2 1 000 nmol/L棕櫚酸能夠成功誘導3T3-L1脂肪細胞凋亡
    2.3 MiR-324-5p在棕櫚酸誘導的凋亡中表達量持續(xù)降低
    2.4 過表達miR-324-5p能夠顯著降低凋亡標志基因的表達
    2.5 干擾miR-324-5p能夠顯著性升高凋亡標志基因表達
    2.6 MiR-324-5p能夠靶向APP 3′UTR
    2.7 過表達miR-324-5p能夠顯著性降低APP表達
    2.8 干擾miR-324-5p能夠顯著增加APP表達
3 討論



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