目的:觀察過氧化氫（H₂O₂）對小鼠成骨前體細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞氧化損傷過程中自噬流的變化,及白藜蘆醇（Res）對H₂O₂致成骨細(xì)胞氧化損傷的干預(yù)作用,探討Res對氧化損傷成骨細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用及自噬在其中的作用。方法:1.將小鼠成骨前體細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞置于飽和濕度、5%CO2、37℃恒溫的孵育箱內(nèi)培養(yǎng);2.取生長狀態(tài)良好的P3-P4代成骨細(xì)胞,通過檢測不同濃度H₂O₂（0.1²00μM）對成骨細(xì)胞活力的影響篩選H₂O₂適宜損傷濃度及H₂O₂對成骨細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白時間變化的影響篩選H₂O₂適宜損傷時間,構(gòu)建成骨細(xì)胞氧化損傷模型。檢測不同濃度Res（0.1-50μM）對H₂O₂致成骨細(xì)胞活力下降的干預(yù)作用,初步篩選Res干預(yù)濃度,檢測不同濃度Re... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

實驗簡要流程圖

研究生學(xué)位論文 過氧化氫對成骨細(xì)胞自噬流的影響及白前冷卻的 PBS（4°C）洗滌細(xì)胞 1 次，以 1000rpm 的轉(zhuǎn)速上清；工作濃度的 Binding Buffer（1×）300μL 重新把細(xì)胞懸 AnnexinV-FITC（5μL）混勻，置于暗室內(nèi)或鋁箔包裹in；入 5μL 的 PI 在上機(jī)前 3-5min。補(bǔ)加工作濃度的 Binding Buffer（1×）200μL 在上機(jī)前（見北京索萊寶流式檢測試劑盒說明書）。氧化應(yīng)激水平測定胞活性氧（ROS）檢測圖 2：

3 細(xì)胞氧化應(yīng)激水平測定3.1 細(xì)胞活性氧（ROS）檢測如下圖 2： DCF（二氯熒光黃）其熒光強(qiáng)度與 ROS 生成呈正相關(guān)性圖 2 細(xì)胞活性氧（ROS）檢測原理示意圖步驟：具體操作方法按照北京索萊寶活性氧檢測試劑盒說明書。3.2 氧化應(yīng)激指標(biāo) MDA、SOD、TAC 檢測）丙二醛（MDA）測定如下圖 3：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3455953