目的糖尿病及其并發(fā)癥作為一類常見的慢性疾病,給患者個人以及社會帶來了巨大的負(fù)擔(dān)。糖尿病發(fā)病機(jī)制眾多,其中胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞的損傷及功能障礙被認(rèn)為在糖尿病發(fā)病過程中起重要作用,而全身慢性炎癥則被認(rèn)為是導(dǎo)致胰島抵抗和胰島素分泌絕對/相對不足一個重要因素。作為天然免疫系統(tǒng)的重要受體,Toll樣受體家族（Toll like receptors,TLRs）在誘導(dǎo)機(jī)體炎癥因子的釋放、促進(jìn)相關(guān)疾病的發(fā)生中起著重要的作用。另外,作為在胰腺中表達(dá)較高的受體,TLR3相關(guān)信號通路在調(diào)節(jié)免疫炎癥和葡萄糖穩(wěn)態(tài)過程中起重要調(diào)節(jié)作用,但具體作用機(jī)制尚不明確。本研究選用小鼠胰島β細(xì)胞株（NIT-1）為研究對象,用TLR3的特異性激動劑聚肌胞Poly（I:C）（PIC）刺激小鼠的胰島β細(xì)胞。旨在探討激活TLR3信號通路對胰島β細(xì)胞增殖和凋亡的影響與可能的作用機(jī)制。方法采用NIT-1細(xì)胞株為研究對象,用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,定期更換細(xì)胞培養(yǎng)液。根據(jù)細(xì)胞生長情況進(jìn)行傳代培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞處于增殖期比例達(dá)到80%-90%時進(jìn)行實驗分組。分為空白對照組及實驗組,分別接種在96孔板上進(jìn)行培養(yǎng)。24小時候后觀察各組細(xì)胞貼壁和生長... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度PIC干預(yù)后，CCND1蛋白表達(dá)情況

263.2凋亡相關(guān)分子蛋白Caspase-3在予以不同濃度PIC處理后，凋亡相關(guān)蛋白分子caspase3的表達(dá)出現(xiàn)了明顯改變。caspase3可以分為無活性的前體pro-CASP3以及有活性的cleaved-CASP3。通過與GAPDH這一內(nèi)參相比較，pro-CASP3在低濃度和中濃度PIC刺激時表達(dá)量較空白對照組有差異（P<0.05），但是其上調(diào)程度明顯低于高濃度刺激（P<0.0001）；各干預(yù)組經(jīng)PIC刺激后，cleaved-CASP3蛋白表達(dá)量較空白對照組也明顯上調(diào)，且升高幅度呈濃度依賴性（P<0.0001），蛋白印跡條帶與統(tǒng)計結(jié)果見圖4。圖4：不同濃度PIC干預(yù)后，caspase3蛋白表達(dá)情況注：(BLANK:正常組，PIC-30:30μg/mlPIC組，PIC-60:60μg/mlPIC組，PIC-90:90μg/mlPIC組，GAPDH:glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,PIC:polyinosinic:polycytidylicacid.*:P<0.05,***:P<0.0001)

273.3TRIF如圖5所示，相比于空白對照組，NIT-1細(xì)胞在經(jīng)不同濃度PIC干預(yù)后，TRIF蛋白表達(dá)均呈現(xiàn)明顯上調(diào)（P<0.0001）。在60μg/ml和90μg/ml濃度下刺激時，TRIF蛋白上調(diào)程度較低濃度（30μg/ml）時有明顯差異（P<0.0001），且呈現(xiàn)出濃度依賴的趨勢。願硜硜願塚顛圖5：不同濃度PIC干預(yù)后，TRIF蛋白表達(dá)情況注：(BLANK:正常組，PIC-30:30μg/mlPIC組，PIC-60:60μg/mlPIC組，PIC-90:90μg/mlPIC組，GAPDH:glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,PIC:polyinosinic:polycytidylicacid,TRIF:Toll/IL-1receptordomaincontainingadaptorproteininducingIFN-β.***:P<0.0001)3.4NF-κB如圖6所示，相比于空白對照組，在經(jīng)不同濃度PIC干預(yù)后，NIT-1細(xì)胞NF-κB蛋白表達(dá)均出現(xiàn)明顯上調(diào)，且呈現(xiàn)濃度依賴性上調(diào)（P<0.0001）。高濃度PIC（90μg/ml）刺激下，NF-κB表達(dá)明顯高于對照組，且高于低濃度與中濃度刺激組（P<0.0001）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]艾塞那肽通過TLR-3信號減輕糖脂毒性對胰島β細(xì)胞的損害[J]. 朱祎婧,胡朝恩,鐘大鵬,熊倩,艾智華.  西南國防醫(yī)藥. 2019(08)
[2]糖脂毒性誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞炎癥因子過表達(dá)的研究[J]. 胡朝恩,鐘大鵬,艾智華.  檢驗醫(yī)學(xué)與臨床. 2018(12)
[3]中國2型糖尿病防治指南（2017年版）[J]. Chinese Diabetes Society;.  中國實用內(nèi)科雜志. 2018(04)
[4]小膠質(zhì)細(xì)胞在糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用研究進(jìn)展[J]. 俞曉燕,趙玉武.  中華糖尿病雜志. 2015 (08)
[5]Toll樣受體3對胰島β細(xì)胞增殖及胰島素分泌的影響[J]. 鐘大鵬,呈煜,胡朝恩,劉陽,鄒強(qiáng),艾智華.  檢驗醫(yī)學(xué)與臨床. 2014(20)
[6]Toll樣受體3配體poly（I:C）干預(yù)對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的影響[J]. 李穎媛,冉瑞金,陳小麗,唐德榮,田洪益,杜利平,張學(xué)東.  中國生物制品學(xué)雜志. 2014(03)
[7]Toll樣受體3在糖尿病模型大鼠脊髓中的表達(dá)[J]. 顏建娥,朱濤.  臨床麻醉學(xué)雜志. 2012(12)
[8]人體免疫系統(tǒng)簡說[J]. 李天虛.  當(dāng)代醫(yī)學(xué). 2010(01)
[9]糖尿病病因與發(fā)病機(jī)理[J]. 陳曉麗,計仁軍.  中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用. 2008(24)
[10]Caspase-8及Caspase-3與細(xì)胞凋亡[J]. 毛德文,陳月橋,王麗,武建華.  遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2008(10)



本文編號：3444745