目的:鍶是一種與鈣同族且化學(xué)性質(zhì)相似的堿土金屬,它具有良好的親骨活性,可以促進(jìn)成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成,同時抑制破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收,促進(jìn)骨骼基質(zhì)礦化,增加骨密度。鍶類藥物以及衍生生物材料在骨損傷與修復(fù)相關(guān)領(lǐng)域受到高度的關(guān)注。雖然目前已有多篇文獻(xiàn)報道了鍶的促成骨作用,但其相關(guān)分子機制報道相對較少,尚需進(jìn)一步探討其具體分子機制,為其在臨床和生物材料中的應(yīng)用提供支持證據(jù)。細(xì)胞自噬,又稱巨自噬或宏自噬,是一種發(fā)生于真核細(xì)胞內(nèi)的高度保守的自我降解現(xiàn)象,具有維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的作用。自噬在細(xì)胞的生長,分化,成熟與內(nèi)穩(wěn)態(tài)維持等多個方面均具有非常重要的作用。近期,有文章報道細(xì)胞自噬參與調(diào)控人體干細(xì)胞的成骨分化過程,但目前尚不清楚細(xì)胞自噬是否在鍶誘導(dǎo)細(xì)胞成骨分化的過程中也發(fā)揮了相關(guān)的調(diào)控作用。本研究主要通過檢測經(jīng)鍶處理的小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3-E1亞克隆14型的成骨分化情況與細(xì)胞自噬水平變化,探討鍶發(fā)揮促進(jìn)成骨分化作用的相關(guān)分子機制。方法:1.鍶的細(xì)胞毒性:應(yīng)用不同濃度（0、3、6、12、24、48、96 mM）的鍶離子溶液處理細(xì)胞并培養(yǎng)3天,通過MTT方法檢測細(xì)胞增殖情況;2.鍶促成骨分化作用:應(yīng)用實時熒... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度鍶對MC3T3-E1細(xì)胞生長增殖的影響結(jié)果

28圖 2 鍶誘導(dǎo) MC3T3-E1 細(xì)胞成骨分化注：圖 A，B 表示 MC3T3 細(xì)胞經(jīng)不同濃度的鍶刺激 3 天后 RunX-2 與 OCN 的相對核酸表達(dá)量，**表示 p<0.01，***表示 p<0.005 ，****表示 p<0.001,圖 C 為細(xì)

30圖 3 鍶誘導(dǎo)成骨分化的過程中細(xì)胞自噬水平的檢測注：圖 A，B，C 為從蛋白水平檢測細(xì)胞經(jīng)鍶（3mM）處理后細(xì)胞內(nèi) SQSTM1/p62以及 LC-3 I 型/II 型蛋白的表達(dá)情況，tubulin 作為內(nèi)參，*代表 p<0.05 ，**代表p<0.01，圖 D 為兩組細(xì)胞經(jīng)單丹黃酰尸胺染色后于熒光顯微鏡下直接觀察帶有綠色熒光的自噬小體；4.抑制細(xì)胞內(nèi)自噬過程影響鍶促進(jìn)細(xì)胞成骨分化作用為了進(jìn)一步明確細(xì)胞自噬在鍶促進(jìn)成骨分化過程中的作用，我們選用自噬抑制劑 3-甲基腺嘌呤（3-MA）預(yù)先處理 MC3T3-E1 細(xì)胞，抑制細(xì)胞基礎(chǔ)自噬水平。從圖四結(jié)果可以看出，細(xì)胞經(jīng) 3-MA 處理后，STSQM1/p62 蛋白表達(dá)增加，在細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)蓄積，而 LC-3 II 型蛋白表達(dá)下降，LC-3 I 型蛋白表達(dá)增加，LC-3I/II 比值未出現(xiàn)倒置，提示細(xì)胞自噬處于受抑制的狀態(tài)。同時細(xì)胞經(jīng) MDC 熒光染色后視野內(nèi)幾乎看不到帶有綠色熒光的酸性小體，呈現(xiàn)出與蛋白電泳結(jié)果相類似的趨勢，3-甲基腺嘌呤的預(yù)處理可抑制細(xì)胞自噬活動。而此時繼續(xù)使用 3mM


本文編號：3440671