目的探究CML調(diào)控基質(zhì)小泡釋放從而介導(dǎo)糖尿病斑塊內(nèi)鈣化的具體機(jī)制。方法（1）第一部分選取2017年至2020年在江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院的患者71例,根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)將患者分為糖尿病組（A組）,糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化組（B組）,糖尿病斑塊內(nèi)鈣化組（C組）。采集三組患者的血清學(xué)樣本,通過差速離心法分離血清中基質(zhì)小泡（MVs）,進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。（2）第二部分6周齡雄性ApoE^-/-小鼠適應(yīng)環(huán)境1周,予40mg/kg/day鏈脲佐菌素腹腔注射,連續(xù)5天。2周后血糖水平超過300mg/dL的ApoE^-/-小鼠入組。將糖尿病ApoE^-/-小鼠隨機(jī)分為三組:對(duì)照組（普食,n=8）、高脂組（高脂飲食,n=8）、CML組（高脂飲食+尾靜脈注射CML,n=8）,連續(xù)飼養(yǎng)32周后對(duì)小鼠進(jìn)行安樂死,選取主動(dòng)脈組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)染色（HE染色、油紅O染色、免疫熒光染色、Von Kossa染色）及分子生物學(xué)檢測(cè)。（3）第三部分將小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（ASMCs）分為三組:對(duì)照組、ox-LDL組、CML組。所有細(xì)胞經(jīng)... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CD9和CML的濃度及相關(guān)性

Nε-羧甲基賴氨酸調(diào)控的平滑肌細(xì)胞基質(zhì)小泡通過Sortilin促進(jìn)糖尿病斑塊內(nèi)鈣化16圖1.2CML對(duì)ApoE-/-小鼠AS及斑塊內(nèi)鈣化形成的影響。A：油紅O染色顯示AS斑塊，斑塊內(nèi)鈣化由VonKossa染色檢測(cè)。B：ELISA檢測(cè)CML在主動(dòng)脈中的濃度。C：鈣含量測(cè)定比較各組主動(dòng)脈的鈣含量。D：ImageJ軟件測(cè)量主動(dòng)脈斑塊面積與主動(dòng)脈面積的比率。*表示與對(duì)照組相比，P<0.05；#表示與高脂組相比，P<0.05。Figure1.2EffectofCMLonatheroscleroticplaqueformationandcalcificationinApoE-/-mice.A:OilredOstainingshowedatheroscleroticplaques,andcalcificationinaorticatheroscleroticplaqueswasdetectedbyVonKossastaining.B:ELISAwasusedtodetecttheconcentrationofCMLinaorta.C:Calciumcontentdeterminationcomparesthecalciumcontentoftheaortaineachgroup.D:ImageJsoftwaremeasurestheratioofaorticplaqueareatoaorticarea.*P<0.05comparedwithNCgroup;#P<0.05comparedwithHFDgroup.4.4CML調(diào)控平滑肌細(xì)胞分泌MVs用不同濃度的CML處理MOVAS細(xì)胞，經(jīng)過4天的鈣化誘導(dǎo)，分離并定量培養(yǎng)基中的MVs。結(jié)果顯示，隨著CML濃度的增加，平滑肌細(xì)胞釋放的MVs數(shù)量也隨之增加（圖1.3）。但是與20μM濃度的CML相比，40μM濃度的CML刺激下，平滑肌細(xì)胞分泌的MVs數(shù)量反而減少，我們推測(cè)這可能與高濃度CML的細(xì)胞毒性有關(guān)。綜上，這些結(jié)果提示CML能夠調(diào)控平滑肌細(xì)胞分泌MVs，那么MVs是否在CML促進(jìn)斑塊內(nèi)鈣化的過程中發(fā)揮作用？

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖1.3CML對(duì)平滑肌細(xì)胞分泌MVs的影響。A：NTA檢測(cè)ASMCs分泌MVs的濃度。B：NTA檢測(cè)MVs的純度和粒徑。C：不同粒徑物質(zhì)的濃度分布。Figure1.3EffectofCMLonmatrixvesiclessecretedbysmoothmusclecells.A:ConcentrationofMVssecretedbyASMCswasdetectedbyNTA.B:ThepurityanddiameterofMVs.C:Concentrationdistributionofsubstanceswithdifferentdiameter.4.5CML刺激平滑肌細(xì)胞分泌的MVs促進(jìn)鈣化我們將20μMCML組中平滑肌細(xì)胞分泌的MVs分別以210∧9Particles/kg/day、410∧9Particles/kg/day、810∧9Particles/kg/day的濃度通過尾靜脈注射進(jìn)糖尿病ApoE-/-小鼠體內(nèi)，連續(xù)注射5天。高脂飲食飼喂16周后，通過VonKossa染色和茜素紅染色觀察MVs對(duì)鈣化的影響。結(jié)果表明，隨著MVs濃度的增加，斑塊內(nèi)鈣化的程度加重（圖1.4A）。鈣含量結(jié)果顯示低濃度MVs組、中濃度MVs組、高濃度MVs組的動(dòng)脈鈣含量分別是CML組的1.51倍，2.45倍和3.9倍（圖1.4C）。接著我們對(duì)MOVAS細(xì)胞進(jìn)行了相同的處理，鈣化誘導(dǎo)4天后進(jìn)行茜素紅染色，結(jié)果與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一致（圖1.4B）。這些結(jié)果表明，CML刺激下，平滑肌細(xì)胞分泌的MVs在動(dòng)物和細(xì)胞水平上都促進(jìn)鈣化。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3440076