慢病毒介導(dǎo)的過(guò)表達(dá)或沉默MnSOD對(duì)Res處理的RA-FLSs增殖和凋亡的影響
發(fā)布時(shí)間：2021-10-07 05:58
背景:類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）是一種以成纖維樣滑膜細(xì)胞（fibroblast-like synoviocytes,FLSs）異常增生為主要特征的自身免疫性疾病。它的主要臨床特征是關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥,會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)進(jìn)行性破壞,但是,它的發(fā)病機(jī)理尚不十分清楚。與正常關(guān)節(jié)相比較,RA患者的關(guān)節(jié)滑膜組織異常增生,膨大,臨床表現(xiàn)類(lèi)似于局部侵犯的腫瘤組織,會(huì)侵犯滑膜下軟骨與骨,長(zhǎng)期會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能障礙。所以,RA患者的FLSs的異常增殖和凋亡的失衡被認(rèn)為是RA治療的主要靶向指標(biāo)之一。越來(lái)越多的研究顯示,長(zhǎng)期的炎癥狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致RA患者處于氧化應(yīng)激狀態(tài),活性氧（reactive oxygen species,ROS）在RA-FLSs異常增殖發(fā)揮重要作用。ROS是線(xiàn)粒體氧化呼吸鏈中產(chǎn)生的重要介質(zhì),而錳超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,MnSOD）是位于線(xiàn)粒體內(nèi)的超氧化物歧化酶,是生物體內(nèi)重要的氧自由基清除劑,被認(rèn)為是調(diào)節(jié)ROS平衡的重要決定因素。SIRT3是線(xiàn)粒體中主要的去乙酰化酶,在調(diào)節(jié)ROS和抑制細(xì)胞氧化損傷方面發(fā)揮著重...
【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省
【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
重組慢病毒載體構(gòu)建A：MnSOD過(guò)表達(dá)Lv載體；B：MnSOD干擾Lv載體
圖 4-2 四組穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的建立A：在感染后 72h 后熒光顯微鏡下觀(guān)察到 MOI 為 50 時(shí) GFP 的感染效率；B：PURO 篩選后RA-FLSs 中 GFP 感染效率；C：Westernbloting 圖像顯示 MnSOD 在 MnSOD 過(guò)度表達(dá)組中的表達(dá)增加；D：在 MnSOD 干擾組中抑制 MnSOD 表達(dá)Fig 4-2 The 4 cell lines with stable gene expression, target gene expression.The infection rate of GFP in the RA-FLSs at an MOI of 50 was observed under a fluorescencemicroscope at 72 h following infection (A). The infection rate of GFP in RA-FLSs were screenedby puromycin (B). Representative images of Western bloting demonstrated increased MnSODexpression in the MnSOD overexpression group (C) and suppressed MnSOD expression in theMnSOD RNAi group (D).*P<0.05 vs. NC.
圖 4-3 Res 通過(guò) MnSOD 表達(dá)調(diào)節(jié)線(xiàn)粒體超氧化物的產(chǎn)生、B、C：用 MitoSOXRed 檢測(cè)線(xiàn)粒體超氧化物水平，并用共聚焦激光掃描顯微鏡觀(guān)察熒。D：統(tǒng)計(jì)分析定量顯示了線(xiàn)粒體超氧化物水平，以相對(duì)于 NC 組的百分比變化表示。采單因素方差分析，然后兩兩之間進(jìn)行 SNK-q 分析。*P<0.05、**P<0.01，MnSODRNAivsC；#P<0.05、##P<0.01、MnSOD 過(guò)度表達(dá)組與 NC 的對(duì)比。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù) 5 次，n=5Fig 4-3 Res increases the level of mitochondrial reactive oxygen species through MnSODexpression.he mitochondrial superoxide levels were detected using MitoSOX Red, and the fluorescencmages were obtained using confocal laser scanning microscopy (ABC). The histogram shows thuantification of the mitochondrial superoxide levels, expressed as the percentage change relativo the NC group (D). One–way ANOVA followed by SNK-q test was used for comparisons amonppropriate datasets.*P < 0.05,**P<0.01, MnSOD RNAi vs. NC;#P < 0.05,##P <0.01, MnSOD
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]線(xiàn)粒體活性氧與腫瘤的研究進(jìn)展[J]. 謝麗霞,葉小群. 重慶醫(yī)學(xué). 2017(11)
[2]類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血CD4+T細(xì)胞存在凋亡缺陷[J]. 曹永賀,劉健. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2015(05)
本文編號(hào)：3421485
【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省
【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
重組慢病毒載體構(gòu)建A：MnSOD過(guò)表達(dá)Lv載體；B：MnSOD干擾Lv載體
圖 4-2 四組穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的建立A：在感染后 72h 后熒光顯微鏡下觀(guān)察到 MOI 為 50 時(shí) GFP 的感染效率；B：PURO 篩選后RA-FLSs 中 GFP 感染效率；C：Westernbloting 圖像顯示 MnSOD 在 MnSOD 過(guò)度表達(dá)組中的表達(dá)增加；D：在 MnSOD 干擾組中抑制 MnSOD 表達(dá)Fig 4-2 The 4 cell lines with stable gene expression, target gene expression.The infection rate of GFP in the RA-FLSs at an MOI of 50 was observed under a fluorescencemicroscope at 72 h following infection (A). The infection rate of GFP in RA-FLSs were screenedby puromycin (B). Representative images of Western bloting demonstrated increased MnSODexpression in the MnSOD overexpression group (C) and suppressed MnSOD expression in theMnSOD RNAi group (D).*P<0.05 vs. NC.
圖 4-3 Res 通過(guò) MnSOD 表達(dá)調(diào)節(jié)線(xiàn)粒體超氧化物的產(chǎn)生、B、C：用 MitoSOXRed 檢測(cè)線(xiàn)粒體超氧化物水平，并用共聚焦激光掃描顯微鏡觀(guān)察熒。D：統(tǒng)計(jì)分析定量顯示了線(xiàn)粒體超氧化物水平，以相對(duì)于 NC 組的百分比變化表示。采單因素方差分析，然后兩兩之間進(jìn)行 SNK-q 分析。*P<0.05、**P<0.01，MnSODRNAivsC；#P<0.05、##P<0.01、MnSOD 過(guò)度表達(dá)組與 NC 的對(duì)比。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù) 5 次，n=5Fig 4-3 Res increases the level of mitochondrial reactive oxygen species through MnSODexpression.he mitochondrial superoxide levels were detected using MitoSOX Red, and the fluorescencmages were obtained using confocal laser scanning microscopy (ABC). The histogram shows thuantification of the mitochondrial superoxide levels, expressed as the percentage change relativo the NC group (D). One–way ANOVA followed by SNK-q test was used for comparisons amonppropriate datasets.*P < 0.05,**P<0.01, MnSOD RNAi vs. NC;#P < 0.05,##P <0.01, MnSOD
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]線(xiàn)粒體活性氧與腫瘤的研究進(jìn)展[J]. 謝麗霞,葉小群. 重慶醫(yī)學(xué). 2017(11)
[2]類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血CD4+T細(xì)胞存在凋亡缺陷[J]. 曹永賀,劉健. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2015(05)
本文編號(hào)：3421485
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