第一部分目的:觀察杜仲葉提取物山奈酚（Kae）對卵巢去勢大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨的影響。方法:首先,按照常規(guī)建立卵巢去勢大鼠模型及獲取普通健康雌性SD大鼠,常規(guī)飼養(yǎng)8周,引頸處死大鼠后取后肢,無菌操作下從股骨和脛骨中沖洗出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）,按照常規(guī)方法予以進(jìn)行體外培養(yǎng),傳至第3代后將其分為三組:正常對照組（Control）、骨質(zhì)疏松模型組（OVX）和山奈酚干預(yù)組（OVX+Kae）。Control組使用未行過卵巢去勢手術(shù)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,在體外誘導(dǎo)成骨;OVX組使用卵巢去勢模型大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外誘導(dǎo)成骨;OVX+Kae組是在OVX組的基礎(chǔ)上添加Kae對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行藥物干預(yù)。MTT法檢測Kae的細(xì)胞毒性,茜素紅染色觀察誘導(dǎo)成骨的情況,并檢測誘導(dǎo)成骨后的細(xì)胞中堿性磷酸酶（ALP）的活力水平。同時(shí)使用實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）法檢測各組細(xì)胞中Runx2和Osterix的mRNA相對轉(zhuǎn)錄水平以及通過蛋白質(zhì)免疫印記法（WB）檢測各組細(xì)胞中Runx2和Osterix蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1、不同干預(yù)濃度山奈酚對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均有不同程度的細(xì)胞毒性,且具有明... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

不同干預(yù)濃度的山奈酚對BMSCs的抑制率影響

第一部分 山奈酚促進(jìn)卵巢去勢大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化同干預(yù)濃度山奈酚對 BMSCs 誘導(dǎo)成骨的影響用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨轉(zhuǎn)化，不同行干預(yù)，在成骨誘導(dǎo) 15 天后，使用茜素紅對成骨細(xì)胞進(jìn)行染色，-E 所示：不同濃度的山奈酚干預(yù)下的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)成骨均可見不同數(shù)量的鈣結(jié)節(jié)沉積 (400×)。如圖 2.F 所示：當(dāng)山奈酚干10 和 100μM 時(shí)，鈣結(jié)節(jié)數(shù)量相比 0 和 0.1μM 時(shí)明顯增加，呈現(xiàn)一賴性。結(jié)合 MTT 結(jié)果，提示山奈酚的最佳干預(yù)濃度為 10μM，后續(xù)μM 山奈酚進(jìn)行干預(yù)。

山奈酚促進(jìn)卵巢去勢大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成SCs 誘導(dǎo)成骨后 ALP 水平的影響奈酚干預(yù)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨結(jié)果詳見圖 3：相比于正常大鼠，卵巢去勢后，細(xì)胞中堿性磷酸酶活力水平顯著下降（勢大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)成骨后高（p<0.05 vs. OVX 組）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]mTOR signaling in skeletal development and disease[J]. Jianquan Chen,Fanxin Long.  Bone Research. 2018(01)
[2]杜仲黃酮類3種藥物成分治療大鼠骨質(zhì)疏松的比較研究[J]. 袁真,閔珺,王愷,龍菲,王永靜,羅軍.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2018(02)
[3]杜仲葉通過Shp2激活Erk1/2促進(jìn)BMSCs增殖的研究[J]. 鄧鳴濤,張立超,方寧,陳林攀,戴鵬,戴江華,羅軍,劉榮華.  時(shí)珍國醫(yī)國藥. 2013(06)
[4]杜仲對MC3T3-E1成骨細(xì)胞及OPG/RANKL比值的影響[J]. 徐祥赫,劉釗,王虹,蘇艷芳,顏世倫,張君,張濤.  天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(03)
[5]杜仲化學(xué)活性成分及其藥理學(xué)研究概況[J]. 劉麗君.  亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥. 2013(05)
[6]杜仲化學(xué)成分現(xiàn)代研究[J]. 胡偉.  中醫(yī)臨床研究. 2013(09)
[7]杜仲葉通過激活ERK及AKT磷酸化促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞增殖的研究[J]. 張立超,鄧鳴濤,戴鵬,陳偉才,方寧,陳林攀,杜川,羅軍,劉榮華.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2013(03)
[8]杜仲提取物誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中Fzd受體系列相關(guān)基因表達(dá)的研究[J]. 湯軍,蔡建平,張賢.  成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(01)
[9]杜仲葉對去勢骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝的影響[J]. 戴鵬,鄧鳴濤,張立超,朱美蘭,林思儉,劉榮華,羅軍.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2012(12)
[10]杜仲水/醇提取物促進(jìn)兔脂肪基質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化[J]. 郭延偉,李松,房殿吉.  中國組織工程研究. 2012(32)

碩士論文
[1]杜仲黃酮類單體槲皮素、蘆丁及金絲桃苷促SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 杜川.南昌大學(xué) 2014
[2]杜仲葉總提物雙向調(diào)節(jié)骨代謝平衡機(jī)理研究[D]. 郁暉暉.江西師范大學(xué) 2009



本文編號：3411425