[目的]研究動(dòng)員骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）后,再脫離糖尿病高糖微環(huán)境培養(yǎng),觀察細(xì)胞生物學(xué)活性的變化及血管原性情況,為應(yīng)用EPCs促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面愈合提供依據(jù)。[方法]選用5-8周齡C57雄鼠,10只db/db小鼠為實(shí)驗(yàn)組;10只db/+小鼠為對(duì)照組。采用AMD3100與CSF聯(lián)合動(dòng)員骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞,方法如下;每只小鼠第1天注射AMD3100,后續(xù)連續(xù)注射5天G-CSF,在第10天心臟采血制備EPCs。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EPCs表面特異性標(biāo)志CD34+/CD133+/CD309+細(xì)胞的表達(dá)率,免疫細(xì)胞化學(xué)染色法及攝取Dil-acLDL和結(jié)合FITC-UEA-1雙熒光染色對(duì)EPCs進(jìn)行的鑒定;鑒定為EPCs細(xì)胞后,采用傳代至第三代的EPCs細(xì)胞進(jìn)行PCR定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白印跡法檢測(cè)細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子（stromal cell-derived factor,SDF-1）、趨化因子受體4（CXCR4）基因及蛋白表達(dá)情況。[結(jié)果]①... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖６ＣＣＫ－８增殖實(shí)驗(yàn)折線圖??

ｄｂ／＋細(xì)胞黏附率（６５．７１１±２．３４１）％，ｄｂ／ｄｂ?細(xì)胞黏附率（６１．２３１±７．６８７）％；?ｐ＞０．０５，??兩株細(xì)胞之間變化無明顯差異。??１．７劃痕遷移實(shí)驗(yàn)??將ＥＰＣｓ接種到６孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)Ｏｈ與４８ｈ遷移面積，結(jié)果顯示；０?ｈ和??４８?ｈ?ｄｂ／＋組?ＥＰＣｓ?遷移面積（分別為（２０４０８８．１±２１９．２）叫，（１４４７２４．９士１９９．４），）??比北／仙組（分別為（２００９８５．７±２３２．６）＾１１１；（１５５０７５．３±２１３．１）嘩）明顯較大（／７＜〇．〇５）??有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（圖７）????ｍｍ??圍＿??注：Ａ，Ｃ分別為ｄｂ／＋組Ｏｈ和４８ｈ的遷移面積；Ｂ，Ｄ分別為ｄｂ／ｄｂ組Ｏｈ和４８ｈ的遷移面積??圖７兩組遷移能力的比較??１．８管腔形成實(shí)驗(yàn)??內(nèi)皮祖細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞的特征，在體外具有形成血管樣結(jié)構(gòu)的特征；將內(nèi)??皮祖細(xì)胞接種鋪于Ｍａｔｒｉｇｅｌ板上體外培養(yǎng)６?ｈ后，觀察形成管腔的能力。ｄｂ／＋管??腔形成數(shù)量（２９．３３０?±?１．７６４）個(gè)，ｄｂ／ｄｂ?管腔形成數(shù)量（２４．０００?±?２．０８２）個(gè)；（ｐ＜０．０５）??兩株細(xì)胞之間有明顯差異（圖８）。??Ａ?ｗｍ??注：Ａ，ｄｂ／＋小鼠管腔形成；Ｂ：?ｄｂ／ｄｂ小鼠管腔形成??圖８?ＥＰＣｓ在Ｍａｔｒｉｇｅｌ上成管的特性??２４??

ｄｂ／＋細(xì)胞黏附率（６５．７１１±２．３４１）％，ｄｂ／ｄｂ?細(xì)胞黏附率（６１．２３１±７．６８７）％；?ｐ＞０．０５，??兩株細(xì)胞之間變化無明顯差異。??１．７劃痕遷移實(shí)驗(yàn)??將ＥＰＣｓ接種到６孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)Ｏｈ與４８ｈ遷移面積，結(jié)果顯示；０?ｈ和??４８?ｈ?ｄｂ／＋組?ＥＰＣｓ?遷移面積（分別為（２０４０８８．１±２１９．２）叫，（１４４７２４．９士１９９．４），）??比北／仙組（分別為（２００９８５．７±２３２．６）＾１１１；（１５５０７５．３±２１３．１）嘩）明顯較大（／７＜〇．〇５）??有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（圖７）????ｍｍ??圍＿??注：Ａ，Ｃ分別為ｄｂ／＋組Ｏｈ和４８ｈ的遷移面積；Ｂ，Ｄ分別為ｄｂ／ｄｂ組Ｏｈ和４８ｈ的遷移面積??圖７兩組遷移能力的比較??１．８管腔形成實(shí)驗(yàn)??內(nèi)皮祖細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞的特征，在體外具有形成血管樣結(jié)構(gòu)的特征；將內(nèi)??皮祖細(xì)胞接種鋪于Ｍａｔｒｉｇｅｌ板上體外培養(yǎng)６?ｈ后，觀察形成管腔的能力。ｄｂ／＋管??腔形成數(shù)量（２９．３３０?±?１．７６４）個(gè)，ｄｂ／ｄｂ?管腔形成數(shù)量（２４．０００?±?２．０８２）個(gè)；（ｐ＜０．０５）??兩株細(xì)胞之間有明顯差異（圖８）。??Ａ?ｗｍ??注：Ａ，ｄｂ／＋小鼠管腔形成；Ｂ：?ｄｂ／ｄｂ小鼠管腔形成??圖８?ＥＰＣｓ在Ｍａｔｒｉｇｅｌ上成管的特性??２４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]生長分化因子11對(duì)db/db糖尿病小鼠胰島β細(xì)胞功能的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J]. 胡紹波,李珊,鄒毅,簡(jiǎn)峰.  臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2020(02)
[2]內(nèi)皮祖細(xì)胞外泌體中與血管生成相關(guān)的miRNAs生物信息學(xué)分析[J]. 熊武,孫安夢(mèng),皇毅,全文娟,游鳳姣,楊旭龍,蘭宏偉,蘇紅輝,周建大.  中國醫(yī)師雜志. 2019(04)
[3]AMD3100聯(lián)合G-CSF對(duì)糖尿病小鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員作用[J]. 林曉瑩,汪虹.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(03)
[4]骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞分泌的外泌體對(duì)大鼠創(chuàng)傷性皮膚缺損修復(fù)的促進(jìn)作用[J]. 徐兵,李海樂,劉丹平,張鳳蔚.  吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(04)
[5]《糖尿病足及其相關(guān)慢性難愈合創(chuàng)面的處理》再版發(fā)行[J].   感染、炎癥、修復(fù). 2013(04)
[6]內(nèi)皮祖細(xì)胞在糖尿病血管病變中的作用及干預(yù)治療[J]. 章容,李素梅.  國際病理科學(xué)與臨床雜志. 2009(04)

碩士論文
[1]AMD3100對(duì)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1誘導(dǎo)牙髓再生的影響[D]. 鄭程峰.廣西醫(yī)科大學(xué) 2019
[2]內(nèi)皮祖細(xì)胞外泌體對(duì)2型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用[D]. 尹倩倩.安徽醫(yī)科大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3337118