先天性甲狀腺功能減低癥（Congenital hypothyroidism,CH）,簡稱甲低或甲減,是嬰兒時期的一種較為常見的內(nèi)分泌疾病,嚴重者出現(xiàn)身體發(fā)育遲緩以及不可逆的精神發(fā)育障礙。SLC5A5（Solute carrier family 5 member 5）基因編碼的鈉碘同向轉(zhuǎn)運體（Sodium Iodide Symporter,NIS）是與甲狀腺激素合成密切相關(guān)的質(zhì)膜糖蛋白,其中NIS介導(dǎo)I^-主動轉(zhuǎn)運到甲狀腺濾泡細胞中是甲狀腺激素生物合成的第一步。SLC5A5基因突變可能會引起碘轉(zhuǎn)運缺陷（Iodine transport deficiency,ITD）,進而導(dǎo)致甲低。本研究通過對227例甲狀腺功能減低癥患者的SLC5A5基因的所有外顯子和相鄰區(qū)域進行高通量測序,篩選出突變病例,并對這幾例突變病例的突變位點進行生物信息學(xué)分析。然后對發(fā)現(xiàn)的新發(fā)突變進行功能驗證,進而分析其突變是否對蛋白表達及功能有影響。結(jié)果在四例患者中檢出突變,占患者總?cè)藬?shù)的1.7%;其中一例患者攜帶了復(fù)合雜合突變（c.173＿174del CC,p.P58fs和c.1532G>A,p... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NIS二級結(jié)構(gòu)模型

第二章先天性甲狀腺功能低下癥SLC5A5基因突變篩查9第二章先天性甲狀腺功能低下癥SLC5A5基因突變篩查2.1實驗材料2.1.1研究對象此次研究納入227例來自西安和新疆地區(qū)的CH患者（西安135例，新疆92例；漢族177例，少數(shù)民族50例；男性115例，女性112例）。新生兒先天性甲低篩查方法是對出生后大于72h但小于7d的足月新生兒充分哺乳，足跟采血，專用濾紙片測TSH值。但由于此方法僅能檢測到原發(fā)性甲低和高TSH癥，不能檢出中樞性甲低等。介于技術(shù)及個體水平的差異，約5%的先天性甲低患者無法通過新生兒篩查檢出。因此若TSH≥20uIU/mL則初步確診為陽性患者并召回復(fù)查如圖3所示[53]；若TSH水平正常但出現(xiàn)臨床疑似甲低者也應(yīng)立即召回并復(fù)查。復(fù)查時，若TSH水平高而FT4水平低，被診斷為先天性甲低；若TSH水平高而FT4水平正常，被診斷為高TSH癥；若TSH水平正常或低，F(xiàn)T4水平低，被診斷為中樞性或繼發(fā)性甲低。此外，也可通過圖3所示的其它診斷手段進行輔助檢測。圖3甲低診斷流程Figure3Diagnosisprocessofhypothyroidism

第二章先天性甲狀腺功能低下癥SLC5A5基因突變篩查19疑似致病位點進行驗證（圖4），其中c.1313C>A和c.1915C>T是反向測序結(jié)果。圖4SLC5A5新發(fā)突變sanger測序圖Figure4SangersequenceofSLC5A5newmutation2.6.3計算機軟件預(yù)測突變對蛋白功能的影響SLC5A5基因編碼的NIS蛋白有643個氨基酸，包含13個跨膜域、胞外域和胞內(nèi)域。五個突變的具體分布示意圖如1.2.1中圖1所示；CLCSequenceViewer6.5.2軟件對五個突變的序列保守性分析如圖5所示，其中conservation表示的是序列保守性；四個軟件對5個突變的功能進行預(yù)測，四個軟件預(yù)測結(jié)果均為有害（Damaged，D）或良性（Tolerated，T）則將該位點定性為有害（D）或良性（T），如表6所示。具體結(jié)果如下：p.P58fs位于第二個跨膜域，堿基變化發(fā)生在1號外顯子；高度保守；四個軟件預(yù)測蛋白功能時，盡管只有MutationTaster預(yù)測結(jié)果為有害，其余三個預(yù)測軟件都無法對此類突變做出預(yù)測，但該突變造成了移碼突變，導(dǎo)致第190位氨基酸是終止密碼子，而該蛋白長度為643個氨基酸，因此極大損傷該蛋白的完整性，更無法定位到質(zhì)膜，判定為有害。p.G75A位于拓撲域，堿基變異發(fā)生在1號外顯子；高度保守；四個軟件蛋白功能預(yù)測結(jié)果均顯示有害，因此判定為有害。p.P438Q位于拓撲域，堿基變異發(fā)生于11

【參考文獻】：
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