目的:研究神經(jīng)軸突導(dǎo)向分子Semaphorin 5A（Sema 5A）在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）中的表達(dá)特征,了解Sema 5A誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的作用。方法:1.應(yīng)用ELISA方法檢測62例RA患者與48例健康對照組血清中Sema 5A的濃度,分析其與RA患者疾病活動度、骨破壞程度及各實驗室指標(biāo)的關(guān)系;2.以不同濃度 Sema 5A（0,0.5,1,2.5,5μg/ml）處理 RAW264.7 細(xì)胞,RANKL及PBS為對照組,培養(yǎng)7天后進行抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色,100倍鏡下觀察TRAP陽性細(xì)胞數(shù)量,并計數(shù);3.采用Real-time PCR法檢測RAW264.7細(xì)胞中TRAP,組織蛋白酶（cathepsin-K,CTSK）和金屬基質(zhì)蛋白酶（matrixmetalloproteinases-9,MMP-9）的mRNA表達(dá)水平;4.以 Sema5A（5μg/ml）1ml,處理 RAW264.7 細(xì)胞 48 小時,加入 100ng/... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ｓｅｍａ?５Ａ在ＲＡ中的表達(dá)特點分析??１６??

３．３?Ｓｅｍａ?５Ａ促進ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化??ＴＲＡＰ染色結(jié)果顯示，隨著Ｓｅｍａ５Ａ濃度增加，ＴＲＡＰ染色陽性的破骨細(xì)胞數(shù)逐??漸增多（見圖２Ａ）。??Ａ）?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＲＡＮＫＬ?（１００ｎｇ／ｍＬ）?Ｓｅｍａ５Ａ（０．５｜ｉｇ／ｍＬ）??Ｓｅｍａ５Ａ?（１?ｐｇ／ｍＬ）?Ｓｅｍａ５Ａ?（２．５｜ｉｇ／ｍＬ）?Ｓｅｍａ５Ａ?（５＾ｇ／ｍＬ）??圓Ｍ３??Ｂ）?＊??Ｉ?１??．?＾?．??ｎ．ｓ．??＿?４〇１?＇?＇??＂ｚ?■?☆?１??Ｊ?３０－??ｒＬＬｉｌ??ＲＡＮＫＵ１００ｎｇ／ｍＬｌ?．?．??Ｓｅｍａ５Ａ（ｎｇ／ｍＬ）?０．５?１?２．５?５??圖２?Ｓｅｍａ５Ａ對破骨細(xì)胞形成的影響（＊尸＜０．０５，?＊＊尸＜０．０１）??在無ＲＡＮＫＬ的情況下，Ｓｅｍａ５Ａ５（ａｇ／ｍｌ剌激組ＴＲＡＰ陽性細(xì)胞數(shù)（２４．０士４．４９／??孔），較陰性對照組（３．２５士０．６３／孔）顯著增多（尸＜０．０５），而３６１＾５八５噸／〇１１??組與ＲＡＮＫＬ陽性對照組相比，ＴＲＡＰ陽性細(xì)胞數(shù)無明顯差異（見圖２Ｂ）。??１７??

促進ＥＲＫ磷酸化水平的表達(dá)，在ＲＡＮＫＬ刺激ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞５分鐘和１５分鐘，Ｓｅｍａ??５Ａ?（５ｕｇ／ｍｌ）顯著促進ｐ－ＥＲＫ的表達(dá)水平，而ＪＮＫ和Ｐ３８的磷酸化水平在前后沒有??顯著性變化（圖４）。??ＲＡＮＫＬ?ｆｌＯＯｎ＾ｍＬ）???０?ｍｉｎ?５ｍｉｎ?１０ｍｍ?１５?ｍｉｎ??ＳｅｍａＳＡ?￣?＾?－?＋?－?＋?－?＋?５＿ｎＬ??ｉｉｉｊｊｉｉｌｔｉＰ＇ｉｉ?ｉｐｗａｗｉｉ?ｍｍｍ??ｐ－ｐｌ?Ｓ??吻綱＿＾?ｍｍｍｍ?＾ｍｒｎｔｓｍ?ｍｍｒｎｒｎ：?ｍｍｍ?．丨?ｍｍｍｍ?Ｔ－ＦＴ?Ｐ??■?ＪＬ?＊＂＂＊?ｊ＿ｉ?Ｘ?＼＿Ｘｘ．??ｐ－ＥＲＫ??）Ｔ＾ＪＮＫ??ｐ－ＪＮＫ??ｆｔ?ａ＾ｔｉｎ????????．＂丨?釋■啡導(dǎo)〇￣ｃｉ?ｗＬｌ－ｌ??圖４?Ｓｅｍａ?５Ａ在ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞中對ＭＡＰＫ途徑的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Sema3A在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清及單個核細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 高輝,馬曉旭,郭倩,鄒雅丹,鐘昱超,謝琳峰,邵苗,張學(xué)武.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2017 (05)
[2]Semaphorin 3A在腫瘤中的研究進展[J]. 朱零,宋曉萌.  口腔醫(yī)學(xué). 2016(01)
[3]RANK RANKL和骨保護素在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血和滑液中表達(dá)的研究[J]. 尚鵬,朱平,樊春梅,王彥宏.  中華風(fēng)濕病學(xué)雜志. 2005(07)



本文編號：3329876