發(fā)布時間：2021-08-04 13:17

　　【目的】從細胞以及動物水平研究特立帕肽對激素性骨質疏松的作用及其相關機制;從細胞水平探究特立帕肽對骨細胞氧化應激的緩解作用以及對地塞米松的拮抗作用;從動物水平構建激素性骨質疏松的大鼠模型,驗證特立帕肽的抗骨質疏松作用,并進一步驗證AKT通路在其中的作用機制�！痉椒ā康谝徊糠謴募毎教接懱亓⑴岭牡目寡趸瘧ぷ饔�,分別用地塞米松和特立帕肽處理MLO-Y4細胞系,使用DCFH-DA試劑盒對細胞內的活性氧含量進行檢測,使用激光共聚焦顯微鏡觀察熒光強度;同時使用RT-PCR驗證有關氧化應激相關基因SOD2 mRNA和CAT mRNA的表達量;使用western blot檢測凋亡相關蛋白caspase-3的活性,以便進一步研究特立帕肽是否對骨細胞有抗凋亡作用。第二部分,建立激素性骨質疏松的模型,并用特立帕肽進行干預,觀察其治療激素性骨質疏松的效果;從直觀的角度掃描顯微CT,測量骨量相關指標;同時使用western blot探索AKT信號通路在其中的作用機制。 【結果】1.細胞增殖能力的測定:在第0天時各組細胞的增殖能力相同,在第一天時,地塞米松處理組的細胞增殖能力明顯低于對照組和特立帕肽處理組,... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

A，CCK-8測定細胞的增殖能力，可以發(fā)現(xiàn)特立帕肽能夠促進細胞的增殖，降低地塞米松的副作用；B，免疫熒光觀察細胞的增殖能力，可以發(fā)現(xiàn)特立帕肽能夠促進細胞的增

細胞內活性氧的測定；B，細胞內 SOD2 和 CAT 基因的表達水平；C，細胞增殖實驗確定特立帕肽對細胞增殖的影響可通過降低細胞內活性氧水平實現(xiàn)。Con 為對照組；Dex 為地塞米松組；Dex+Teriparatide 為地塞米松+特立帕肽組；Dex+NAC 為地塞米松+NAC組。※代表 P＜0.05。1.2.3 特立帕肽能夠通過降低細胞內活性氧的水平抑制細胞的凋亡實驗檢測了特立帕肽對細胞凋亡的影響，western blot 結果顯示：特立帕肽能夠顯著地降低細胞內 Cleaved caspase-3 和 Bad 蛋白的表達水平并升高 Bcl-2蛋白的表達水平，這說明特立帕肽能夠抑制骨細胞的凋亡，而地塞米松能夠促進細胞的凋亡，特立帕肽能夠逆轉地塞米松帶來的這種不利作用，結合上述實驗結果可以推論：特立帕肽可通過降低細胞內活性氧的水平抑制細胞的凋亡的，而進一步的實驗研究結果發(fā)現(xiàn)，特立帕肽確實能夠通過抑制細胞內 Cleavedcaspase-3 和 BAD 的表達，并促進 Bcl-2 的表達，從而降低細胞凋亡的水平（圖1.3）。Dex-++

位論文 二、特立帕肽對大鼠 AKT 通路以及骨mowoil）滴在載玻片上，每片 15μl，將有細胞干后室溫約 30min 后放在 4°C，避光保存。分析.0 對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，定量資料以平均值±標6.0 軟件進行統(tǒng)計學作圖如柱狀圖等。符合正態(tài)用獨立樣本 t 檢驗，三組及以上之間比較采用單數(shù)據(jù)為非正態(tài)分布，則使用非參數(shù) Kruskal-Wa P <0.05。 I 型膠原表達鼠的股骨進行骨細胞原代培養(yǎng)，Western-blot 檢對照組相比，地塞米松組 I 型膠原呈低表達，特立帕肽組較地塞米松組 I 型膠原高表達（圖


本文編號：3321767