目的:研究褪黑素（MT）在骨質(zhì)疏松癥（OP）防治中的作用,通過整合骨外科學(xué)、干細(xì)胞技術(shù)、氧化自由基醫(yī)學(xué)等學(xué)科知識(shí),深入闡明MT調(diào)控骨質(zhì)疏松防治的抗氧化相關(guān)機(jī)制,為促進(jìn)骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療提供新的手段。方法:取8周齡Sprague-Dawley雌性大鼠,構(gòu)建去卵巢（OVX）大鼠骨質(zhì)疏松模型,3個(gè)月后提取正常和OVX大鼠股骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSCs）進(jìn)行培養(yǎng),傳代至第2代進(jìn)行檢測。確認(rèn)骨質(zhì)疏松情況下BMMSCs增殖、成骨和抗氧化等能力的變化。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)通過1μM和100μM濃度的MT干預(yù)OP-BMMSCs,CCK-8檢測細(xì)胞增殖,茜素紅染色檢測骨基質(zhì)礦化以及RT-PCR檢測成骨相關(guān)基因（RUNX2,SP7,BGLAP）探究激動(dòng)SIRT1對(duì)OP-BMMSCs增殖和成骨能力的影響,通過相關(guān)試劑盒檢測胞內(nèi)活性氧（ROS）、超氧化物、過氧化氫（H2O2）濃度,總超氧化物歧化酶（SOD）、SOD2和過氧化物酶活力,RT-PCR檢測抗氧化基因表達(dá)以及WesternBlot檢測抗氧化蛋白表達(dá)（SOD1,SOD2,CAT,GPX1,SIRT1）來探究MT對(duì)改變OP-BMMSCs抗氧化能力的作用。... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：摘除ＯＶＸ組大鼠的雙側(cè)卵巢

第一部分?褪黑素通過ＳＩＲＴ１介導(dǎo)的抗氧化機(jī)制調(diào)控骨質(zhì)疏松癥防治的研究??３．?ＢＭＭＳＣｓ的體外分離培養(yǎng)及細(xì)胞培養(yǎng)??在無菌條件下，將大鼠股骨分離，成功將含有少量骨髓的細(xì)胞懸液接種到培養(yǎng)瓶??中，２小時(shí)后可見有少數(shù)細(xì)胞開始貼壁。４８小時(shí)吸出培養(yǎng)液并ＰＢＳ清洗２遍，去除??上層懸浮骨髓和細(xì)胞，加入新培養(yǎng)液后顯微鏡下見貼壁細(xì)胞形態(tài)良好，呈單個(gè)生長或??克隆樣生長，０Ｐ組和Ｎｏｒｍａｌ組細(xì)胞形態(tài)未見明顯區(qū)別。之后每３天規(guī)律換液，待細(xì)??胞融合至８０？９０％時(shí)，用０．２５％Ｔｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ消化細(xì)胞并按１：?２比例進(jìn)行傳代。取??第２代（Ｐ２）細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。多余細(xì)胞凍存于液氮中，供之后使用。??Ｎｏｒｍａｌ?ＯＰ??ｙ?＾?ＴＶ，?Ｖ?／?／?？??？?＾?■?？?￡?ｉ?、?．?＇?／?Ｖ?■?、?？??ｔ?一?‘?＼?＇、？?４?／?＼＼＼?＾??ｉ?、入?ｒ?、？?Ｖ＇?’?：、二?Ｌ、”：－??ｍｍｍ?－．－，■■■■??圖３：體外分離后培養(yǎng)的ＢＭＭＳＣｓ，Ｎｏｒｍａｌ組和ＯＰ組細(xì)胞在Ｐ２代時(shí)在細(xì)胞形態(tài)上??無明顯差別。標(biāo)尺＝１００?（ｉｍ。??４．細(xì)胞增殖檢測??將Ｎｏｒｍａｌ組和ＯＰ組的細(xì)胞，按ｌＯＯＯｃｅｌｌ／孔的密度接種于９６孔板中，分別在第??１、３、５、７天，采用ＣＣＫ－８檢測細(xì)胞增殖能力。從第３天開始就可以發(fā)現(xiàn)，ＯＰ組??細(xì)胞的增殖能力明顯小于Ｎｏｒｍａｌ組。在第７天的時(shí)候，ＯＰ組細(xì)胞的增殖能力較??Ｎｏｒｍａｌ?組下降了?１７．５％。??１２??

圖４：與Ｎｏｒｍａｌ－ＢＭＭＳＣｓ相比，ＯＰ－ＢＭＭＳＣｓ的增殖能力顯著下降

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中國老年骨質(zhì)疏松癥診療指南（2018）[J]. 馬遠(yuǎn)征,王以朋,劉強(qiáng),李春霖,馬迅,王擁軍,鄧廉夫,賀良,楊乃龍,陳伯華,邱貴興,朱漢民,陶天遵,秦嶺,王亮,程曉光.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2018(12)
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本文編號(hào)：3280669