目的:探討表觀遺傳分子—溴結(jié)構(gòu)域蛋白4（bromodomain-containing protein 4,BRD4）對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis,RA）骨破壞的影響。本研究首先通過對人類RA和骨性關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）的關(guān)節(jié)滑膜組織中BRD4表達(dá)的比較;然后再通過RA小鼠模型,探討B(tài)RD4在RA關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞中的作用以及機(jī)制,從而進(jìn)一步闡明RA骨破壞的病理機(jī)制以及為其治療提供理論基礎(chǔ)。方法:本實驗首先通過HE染色及免疫組化技術(shù)檢測RA與OA滑膜組織形態(tài)和BRD4表達(dá)分布。然后再通過Western-Blot檢測BRD4在RA與OA滑膜表達(dá)是否存在差異。建立膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠模型（Collagen-induced arthritis,CIA）,并將小鼠隨機(jī)分為3組:對照組（CONT）、關(guān)節(jié)炎模型組（CIA）、關(guān)節(jié)炎干預(yù)組（CIA+JQ1）。采用qRT-PCR和Western-blot技術(shù)檢測小鼠滑膜組織中BRD4的表達(dá);應(yīng)用HE染色觀察小鼠關(guān)節(jié)中骨質(zhì)破壞差異,應(yīng)用VG染色及酸性磷酸酶染色（Tartrate Resistant Acid Ph... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

OA與RA患者滑膜組織HE染色及OA和RA患者滑膜組織免疫組化結(jié)果（×400）

結(jié)果9圖2BRD4蛋白在RA滑膜與OA滑膜的表達(dá)A：滑膜組織BRD4的Western-blot結(jié)果B：滑膜組織BRD4的蛋白表達(dá)分析（*表示與OA組比較，P<0.05）討論RA屬于自身免疫性疾病，其主要特征是滑膜炎癥和增生、自身抗體產(chǎn)生、軟骨和骨破壞等[12]。OA是以關(guān)節(jié)軟骨退變?yōu)橹饕±砀淖兺嘶膊�，表現(xiàn)為不同程度的關(guān)節(jié)軟骨丟失、骨質(zhì)增生、和滑膜炎等。兩者都有滑膜炎癥狀改變，滑膜炎可導(dǎo)致關(guān)節(jié)骨的局部侵蝕，使骨吸收與骨形成之間的平衡受到干擾，導(dǎo)致凈骨質(zhì)流失。BRD4是BET家族中普遍存在的蛋白，可識別組蛋白尾巴上賴氨酸殘基的N-乙�；�，在調(diào)各種基因的轉(zhuǎn)錄延伸中起著關(guān)鍵作用[13]。越來越多的研究報道了BRD4在炎性疾病的病理學(xué)中的重要作用。相關(guān)研究表明，BET抑制劑可抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中炎性基因和基質(zhì)降解酶的表達(dá)[14]。Jiang等[15]研究證實BRD4可以正調(diào)控高遷移率族蛋白B（highmobilitygroupbox-B,HMGB）進(jìn)而影響細(xì)胞核因子κB（Nuclearfactorkappa-B，NF-κB）信號傳導(dǎo)，從而影響OA的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。本研究中首先運用HE染色分別對滑膜組織的形態(tài)和炎癥細(xì)胞的表達(dá)差異進(jìn)行觀察再通過免疫組化和免疫印跡對BRD4的表達(dá)進(jìn)行定位和定量檢測。證實BRD4

實驗結(jié)果19再通過WesternBlot對對照組和模型組在滑膜組織中BRD4蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測。以GAPDH作為內(nèi)參，將條帶灰度值的差異來作為表達(dá)量的差異。結(jié)果顯示：與對照組相比，模型組中BRD4表達(dá)顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）（圖3B和C）。圖3小鼠滑膜組織BRD4相關(guān)表達(dá)結(jié)果A：BRD4的mRNA水平；B：BRD4蛋白的Western-blot結(jié)果；C：BRD4的蛋白表達(dá)分析（*表示與對照組比較，P<0.05；**表示與對照組比較P<0.01）


本文編號：3274234