研究目的:利用可轉(zhuǎn)化n-6多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids,PUFAs）為n-3多不飽和脂肪酸（n-3PUFAs）的fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠,研究體內(nèi)n-3PUFAs的增加對(duì)小鼠體重和小鼠血液中外泌體mi RNA表達(dá)的影響,探討n-3PUFAs通過(guò)外泌體的miRNA抑制肥胖的作用機(jī)制。研究方法:取健康的6周齡同窩小鼠,提取鼠尾中的DNA,通過(guò)PCR-瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行fat-1基因鑒定,判斷其是否為fat-1轉(zhuǎn)基因的小鼠。將鑒定好的小鼠分為四組:fat-1普通飲食（Normal Diet,ND）組、野生普通飲食組、fat-1高脂飲食組（High Fat Diet,HFD）和野生高脂飲食組,每組6只,進(jìn)行8周的喂食。測(cè)量體長(zhǎng)和體重,并且計(jì)算小鼠的Lee’s指數(shù),判斷高脂飲食喂養(yǎng)誘導(dǎo)的肥胖模型是否建立成功。模型建立成功后獲取小鼠外周血,用超速離心法抽提血漿中的外泌體。電鏡觀察外泌體的表觀情況;粒徑技術(shù)檢測(cè)外泌體顆粒大小;WB追蹤鑒定外泌體。提取分離外泌體內(nèi)的RNA,構(gòu)建文庫(kù)并進(jìn)行mi RNA高通量測(cè)序。根據(jù)測(cè)序結(jié)果,運(yùn)用生物信息學(xué)的方法,篩選差異表達(dá)的... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

fat-1基因瓊脂糖凝膠電泳鑒定結(jié)果

外泌體鑒定結(jié)果

結(jié)果17圖3有效序列中各SmallRNA分類注釋圖Fig3.AnnotationsofSmallRNAClassificationinEffectiveSequence注：HFD-FAT-1、HFD-FAT-2、HFD-FAT-3為高脂飲食的fat-1小鼠血漿樣本，HFD-WT-1、HFD-WT-2、HFD-WT-3為高脂飲食的野生型小鼠血漿對(duì)照樣本。不同類型smallRNA（包括miRNA、rRNA、tRNA等）基因組位置的序列數(shù)目及比例，采用不同顏色進(jìn)行區(qū)分，扇形面積越大，所占比例就越高，其中Others表示所占比例低于1%的smallRNA序列總和，Unmatched表示未比對(duì)上的序列。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]n-3PUFAs調(diào)節(jié)小鼠體重及對(duì)下丘腦自噬與炎癥的影響[D]. 房鑫.青島大學(xué) 2018
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本文編號(hào)：3247091