發(fā)布時間：2021-06-24 12:23

　　研究目的:利用可轉(zhuǎn)化n-6多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids,PUFAs）為n-3多不飽和脂肪酸（n-3PUFAs）的fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠,研究體內(nèi)n-3PUFAs的增加對小鼠體重和小鼠血液中外泌體mi RNA表達的影響,探討n-3PUFAs通過外泌體的miRNA抑制肥胖的作用機制。研究方法:取健康的6周齡同窩小鼠,提取鼠尾中的DNA,通過PCR-瓊脂糖凝膠電泳實驗進行fat-1基因鑒定,判斷其是否為fat-1轉(zhuǎn)基因的小鼠。將鑒定好的小鼠分為四組:fat-1普通飲食（Normal Diet,ND）組、野生普通飲食組、fat-1高脂飲食組（High Fat Diet,HFD）和野生高脂飲食組,每組6只,進行8周的喂食。測量體長和體重,并且計算小鼠的Lee’s指數(shù),判斷高脂飲食喂養(yǎng)誘導(dǎo)的肥胖模型是否建立成功。模型建立成功后獲取小鼠外周血,用超速離心法抽提血漿中的外泌體。電鏡觀察外泌體的表觀情況;粒徑技術(shù)檢測外泌體顆粒大小;WB追蹤鑒定外泌體。提取分離外泌體內(nèi)的RNA,構(gòu)建文庫并進行mi RNA高通量測序。根據(jù)測序結(jié)果,運用生物信息學(xué)的方法,篩選差異表達的... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

fat-1基因瓊脂糖凝膠電泳鑒定結(jié)果

外泌體鑒定結(jié)果

結(jié)果17圖3有效序列中各SmallRNA分類注釋圖Fig3.AnnotationsofSmallRNAClassificationinEffectiveSequence注：HFD-FAT-1、HFD-FAT-2、HFD-FAT-3為高脂飲食的fat-1小鼠血漿樣本，HFD-WT-1、HFD-WT-2、HFD-WT-3為高脂飲食的野生型小鼠血漿對照樣本。不同類型smallRNA（包括miRNA、rRNA、tRNA等）基因組位置的序列數(shù)目及比例，采用不同顏色進行區(qū)分，扇形面積越大，所占比例就越高，其中Others表示所占比例低于1%的smallRNA序列總和，Unmatched表示未比對上的序列。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR-194-5p靶向MEX3A調(diào)控肝癌細胞活性和凋亡的機制[J]. 劉占偉,祖恩霞,潘躍銀,石明宏.  中國老年學(xué)雜志. 2019(18)
[2]外泌體微小RNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷中作用的研究進展[J]. 田其,李明昌.  中國臨床神經(jīng)外科雜志. 2019(09)
[3]肝癌患者血清外泌體內(nèi)miR-665的表達及臨床意義[J]. 屈振,法鎮(zhèn)中,湯建軍,陳衛(wèi)波,江勇,孫冬林.  肝膽胰外科雜志. 2018(06)
[4]外泌體在神經(jīng)炎癥相關(guān)疾病中的研究進展[J]. 葉濟世,夏中元.  醫(yī)學(xué)綜述. 2018(05)
[5]外泌體內(nèi)分子標(biāo)志物檢測及其臨床應(yīng)用[J]. 許文榮,孫瑤湘.  臨床檢驗雜志. 2017(03)
[6]外泌體:為高效藥物投遞策略提供天然的內(nèi)源性納米載體[J]. 李思迪,侯信,亓洪昭,趙瑾,原續(xù)波.  化學(xué)進展. 2016(Z2)
[7]間充質(zhì)干細胞源性外泌體——未來生物療法的理想載體[J]. 張娟,史晉叔,李劍.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2015(04)
[8]fat-1轉(zhuǎn)基因?qū)π∈箫嬍痴T導(dǎo)肥胖的影響[J]. 蓋曉英,馬爽爽,曹錦鵬,張金玉,葛銀林.  青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2015(04)
[9]ω-3多不飽和脂肪酸與腫瘤[J]. 王暉,陳克能.  腫瘤代謝與營養(yǎng)電子雜志. 2014(03)
[10]外泌體及其在腫瘤診療中的意義[J]. 張敏,張晨光,丁衛(wèi).  生理科學(xué)進展. 2014(05)

碩士論文
[1]n-3PUFAs調(diào)節(jié)小鼠體重及對下丘腦自噬與炎癥的影響[D]. 房鑫.青島大學(xué) 2018
[2]內(nèi)源性n-3 PUFA調(diào)節(jié)小鼠體重過程中下丘腦食欲神經(jīng)肽的變化[D]. 江亞娟.青島大學(xué) 2017



本文編號：3247091