發(fā)布時間：2021-06-17 02:49

　　目的探討雌激素是否能通過增強SIRTl的活性進而對成骨細(xì)胞及其通路產(chǎn)生作用。方法 17β-雌二醇（17β-E2）作用于h FOB1.19成骨細(xì)胞24 h,應(yīng)用熒光自噬檢測試劑盒（MDC）檢測成骨細(xì)胞自噬情況;應(yīng)用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)含量;應(yīng)用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測AMPK、磷酸化的AMPK、SIRTl蛋白活性的影響;在17β-E2環(huán)境中,增強或抑制SIRTl的活性,通過電鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞形態(tài)和關(guān)鍵蛋白質(zhì)的改變;應(yīng)用免疫印跡技術(shù)及實時定量PCR檢測17β-E2/SIRT1/AMPK/FOXO3a對細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白BCL-2、Bnip3、m TOR及凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的影響。結(jié)果 17β-E2（10-8mmol/L,10-6mmol/L）增加成骨細(xì)胞的自噬,成骨細(xì)胞內(nèi)LC3II蛋白活性增加;隨著17β-E2濃度的增加,SIRTl蛋白表達(dá)量增加,且活性增強; 17β-E2增加磷酸化AMPK的水平,且AMPK可以增加成骨細(xì)胞內(nèi)SIRTl的活性; SIRTl激動劑SRT1720及抑制劑Ex527可以干預(yù)17β-E2/SIRTl對成骨細(xì)胞細(xì)... 

【文章來源】：中國骨質(zhì)疏松雜志. 2020,26(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

17β-E2對成骨細(xì)胞內(nèi)LC3II蛋白活性的作用

MDC檢測17β-E2對成骨細(xì)胞自噬的影響

在體外細(xì)胞胞實驗中，用SRT1720(SIRT1激活劑)或Ex527(SIRT1抑制劑)預(yù)處理細(xì)胞2 h，并添加了10-6mmol/L 17β-E2作用24 h，來觀察SIRT1活性的增強和減弱對17β-E2中成骨細(xì)胞自噬的影響。本研究用免疫熒光抗體標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白LC3B蛋白(綠)，DAPI染色劑染細(xì)胞核(藍(lán))，并用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞自噬(圖5 A)。與空白對照組相比，10-6mmol/L17β-E2可以增強自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)，而SRT1720可以強化17β-E2此作用(P<0.05)。圖4 17β-E2/SIRT1對細(xì)胞內(nèi)AMPK蛋白活性的影響。


本文編號：3234308