目的探討雌激素是否能通過增強SIRTl的活性進而對成骨細胞及其通路產(chǎn)生作用。方法 17β-雌二醇（17β-E2）作用于h FOB1.19成骨細胞24 h,應用熒光自噬檢測試劑盒（MDC）檢測成骨細胞自噬情況;應用蛋白免疫印跡技術檢測自噬相關蛋白LC3的表達含量;應用蛋白免疫印跡技術檢測AMPK、磷酸化的AMPK、SIRTl蛋白活性的影響;在17β-E2環(huán)境中,增強或抑制SIRTl的活性,通過電鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀觀察細胞形態(tài)和關鍵蛋白質的改變;應用免疫印跡技術及實時定量PCR檢測17β-E2/SIRT1/AMPK/FOXO3a對細胞自噬相關蛋白BCL-2、Bnip3、m TOR及凋亡相關蛋白caspase-3的影響。結果 17β-E2（10-8mmol/L,10-6mmol/L）增加成骨細胞的自噬,成骨細胞內LC3II蛋白活性增加;隨著17β-E2濃度的增加,SIRTl蛋白表達量增加,且活性增強; 17β-E2增加磷酸化AMPK的水平,且AMPK可以增加成骨細胞內SIRTl的活性; SIRTl激動劑SRT1720及抑制劑Ex527可以干預17β-E2/SIRTl對成骨細胞細... 

【文章來源】：中國骨質疏松雜志. 2020,26(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

17β-E2對成骨細胞內LC3II蛋白活性的作用

MDC檢測17β-E2對成骨細胞自噬的影響

在體外細胞胞實驗中，用SRT1720(SIRT1激活劑)或Ex527(SIRT1抑制劑)預處理細胞2 h，并添加了10-6mmol/L 17β-E2作用24 h，來觀察SIRT1活性的增強和減弱對17β-E2中成骨細胞自噬的影響。本研究用免疫熒光抗體標記自噬相關蛋白LC3B蛋白(綠)，DAPI染色劑染細胞核(藍)，并用激光共聚焦顯微鏡觀察細胞自噬(圖5 A)。與空白對照組相比，10-6mmol/L17β-E2可以增強自噬相關蛋白LC3的表達，而SRT1720可以強化17β-E2此作用(P<0.05)。圖4 17β-E2/SIRT1對細胞內AMPK蛋白活性的影響。


本文編號：3234308