目的探討miR-150通過(guò)T細(xì)胞對(duì)小鼠類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病的影響。方法1采用miR-150基因敲除小鼠（miR-150 knockout,miR-150KO）及其C57BL/6J野生型正常對(duì)照小鼠（wildtype,WT）,采用鼠尾基因組PCR擴(kuò)增鑒定小鼠基因型,采用real-time PCR確定miR-150基因在miR-150KO小鼠和WT小鼠中的表達(dá)變化;2采用雞Ⅱ型膠原（CIA）和弗氏完全佐劑的乳化物注射小鼠尾部,制備miR-150KO小鼠和WT小鼠的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型;3應(yīng)用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠的后肢厚度,腫脹程度采用動(dòng)物關(guān)節(jié)指數(shù)評(píng)分,比較miR-150KO小鼠和WT小鼠的發(fā)病率和發(fā)病嚴(yán)重程度;4應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-150KO小鼠和WT小鼠脾臟和腹股溝淋巴結(jié)中T細(xì)胞和NKT細(xì)胞總量,檢測(cè)脾臟CD4⁺T細(xì)胞和NKT細(xì)胞中IFN-γ、IL-4、IL-17細(xì)胞因子的表達(dá)變化;5制備實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組miR-150KO和WT小鼠踝關(guān)節(jié)病理切片,進(jìn)行HE染色和免疫組化,比較類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎miR-150KO和WT小鼠的組織病理變化和炎癥因子浸潤(rùn)情況。結(jié)果1建立miR-150K... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)小鼠基因型的鑒定

Real-timePCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)小鼠中miR-150表達(dá)水平

（1）隨機(jī)選取12周以上鼠齡雄性的miR-150KO 和C57BL/6J(WT)小鼠各15只,分為溶劑對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組小鼠尾部注射雞Ⅱ型膠原和弗氏完全佐劑的乳化物,溶劑對(duì)照組注射冰醋酸和弗氏完全佐劑的乳化物（見(jiàn)圖3）（2）第一次膠原注射21天后,進(jìn)行第二次注射,進(jìn)行加強(qiáng)免疫,注射完成后用游標(biāo)卡尺對(duì)小鼠踝關(guān)節(jié)同一部位進(jìn)行測(cè)量,且每隔3天就測(cè)量一次,記錄數(shù)據(jù)并觀察小鼠的后足腫脹程度,圖4為小鼠發(fā)病后后肢腫脹的圖片,可以觀察到WT小鼠發(fā)病后后足腫脹程度要比150KO小鼠嚴(yán)重,圖5是小鼠后足厚度測(cè)量值的變化圖,圖6是關(guān)節(jié)指數(shù)評(píng)分圖,結(jié)合兩個(gè)圖可以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組中WT小鼠發(fā)病時(shí)間早,從第二次注射第3天開(kāi)始發(fā)病,發(fā)病的關(guān)節(jié)指數(shù)評(píng)分為1。第6天時(shí),實(shí)驗(yàn)組WT小鼠后肢腫脹明顯,關(guān)節(jié)指數(shù)評(píng)分升為4,而實(shí)驗(yàn)組150KO小鼠后肢有輕微腫脹,評(píng)分為1,且實(shí)驗(yàn)組150KO發(fā)病小鼠后肢從第36天開(kāi)始有減輕的趨勢(shì)。在第54天統(tǒng)計(jì)小鼠的發(fā)病率,實(shí)驗(yàn)組150KO小鼠的發(fā)病率明顯低于WT小鼠,差異具有顯著性（*P<0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA-143在肥胖及胰島素抵抗中的研究進(jìn)展[J]. 張向君,王加林.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2013(06)
[2]MiR-150特異調(diào)控胸腺iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟[J]. 鄭全輝,張愛(ài)紅,鄭愛(ài)華,陸斌,張慶波,侯志宏,李娟,陳淑媛.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2013(02)
[3]芍藥苷對(duì)膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)信號(hào)的調(diào)節(jié)作用[J]. 張玲玲,魏偉,汪慶童,陳鏡宇,陳尹,吳華勛.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2008(03)
[4]類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展[J]. 陳曦,張成義.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2006(03)
[5]T細(xì)胞在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的作用[J]. 郭麗麗.  上海免疫學(xué)雜志. 2002(03)



本文編號(hào)：3220190