發(fā)布時間：2021-05-22 04:19

　　目的:課題組前期實驗結(jié)果表明P-gp（P-glycoprotein,P-gp）過表達能增加大鼠胰島β細胞株（INS-1）高糖刺激下胰島素的分泌,并不影響胰島素的生物合成,但其中的具體機制尚不清楚。本研究在進一步探討P-gp過表達促進INS-1細胞胰島素分泌的機制的同時,通過構(gòu)建大鼠胰島β細胞特異性P-gp過表達模型,觀察體內(nèi)環(huán)境中P-gp過表達對胰島β細胞分泌、分化、增殖以及凋亡的影響。方法:（1）實驗對象為INS-1細胞和SD大鼠胰島;（2）INS-1細胞:將Ad-abcb1b腺病毒和陰性對照病毒以濃度50×106/m L在無血清培養(yǎng)基中感染INS-1細胞4小時后,換成正常含有胎牛血清的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育44小時;（3）用弱RIPA萃取細胞總蛋白,胞漿/胞膜蛋白提取試劑盒萃取細胞膜蛋白和漿蛋白,Western Blot法檢測P-gp、L型鈣離子通道蛋白（Cav1.2）、小窩蛋白-1（CAV1）、PKA、CREB、SNAP25、STX1A、SYT1、p-CREB、GAPDH、Tublin等相關(guān)蛋白的表達;（4）應用染色質(zhì)免疫沉淀（Ch IP）方法檢測CREB與Cav1.2啟動子... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、P-糖蛋白過表達促進INS-1 細胞分泌的機制研究
    1.1 對象和方法
        1.1.1 研究對象
        1.1.2 實驗試劑和儀器
        1.1.3 實驗方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 P-gp過表達對Cav1.2 表達的影響
        1.2.2 P-gp過表達對CAV1、SNAP25 及其之間的相互作用的影響
    1.3 討論
        1.3.1 P-gp過表達對INS-1 細胞Cav1.2 及胰島素分泌的影響
        1.3.2 P-gp調(diào)節(jié)Cav1.2 表達的機制
        1.3.3 P-gp通過CAV1、SNAP25 及其之間的相互作用調(diào)節(jié)INS-1 細胞胰島素的分泌
    1.4 小結(jié)
二、P-糖蛋白過表達對INS-1 和胰島β細胞分化的影響
    2.1 對象和方法
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 實驗試劑和儀器
        2.1.3 實驗方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 轉(zhuǎn)基因大鼠基因鑒定結(jié)果
        2.2.2 P-gp過表達對INS-1 細胞分化的影響
        2.2.3 P-gp過表達對胰島β細胞分化的影響
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、P-糖蛋白過表達對大鼠胰島增殖、凋亡、分泌的影響
    3.1 對象和方法
        3.1.1 研究對象
        3.1.2 實驗試劑和儀器
        3.1.3 實驗方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 P-gp過表達對大鼠胰島素分泌的影響
        3.2.2 P-gp過表達對大鼠胰島素增殖、凋亡的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Comparative identification of Ca～（2+） channel expression in INS-1 and rat pancreatic β cells[J]. Fei Li,Zong-Ming Zhang,Department of General Surgery, Digestive Medical Center,The First Affiliated Hospital,Medical School,Tsinghua University,Beijing 100016,China.  World Journal of Gastroenterology. 2009(24)



本文編號：3200969