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轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)篩選糖尿病足差異表達(dá)的RNA及可能ceRNA機(jī)制的初步研究

發(fā)布時(shí)間:2021-05-20 06:49
  背景:糖尿病足(Diabetic foot,DF)是指糖尿。―iabetic mellitus,DM)患者由于合并神經(jīng)病變及各種不同程度末梢血管病變而導(dǎo)致下肢感染、潰瘍形成和(或)深部組織的破壞,其具有較高的患病率、致殘率和死亡率,然而目前DF的發(fā)病機(jī)制仍不明確。隨著轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA Sequencing,RNA-Seq)技術(shù)的不斷發(fā)展,越來(lái)越多疾病的發(fā)病機(jī)制逐漸被發(fā)現(xiàn),測(cè)序技術(shù)也逐漸成為熱點(diǎn)。RNA-Seq技術(shù)可以全面快速的獲取某一物種特定器官或組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本,包括編碼RNA(messenger RNA,mRNA)和非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)。ncRNA不編碼蛋白質(zhì),在RNA水平上即可發(fā)揮各種生物學(xué)功能的RNA,而競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)作為一種假說(shuō)揭示了RNA間相互作用的新機(jī)制。近年來(lái),也有研究表明ceRNA調(diào)控機(jī)制揭示了疾病發(fā)病機(jī)制及治療的新方向。RNA-seq技術(shù)在多種疾病的分子病因?qū)W研究中取得了一系列的成果,但是在DF中相關(guān)研究尚缺乏。因此有望通過(guò)RNA-Seq技術(shù)分析... 

【文章來(lái)源】:南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】:60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 糖尿病足的概述
    1.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的概述
    1.3 ceRNA的概述
第2章 材料與方法
    2.1 編碼RNA建庫(kù)及測(cè)序流程
        2.1.1 研究材料
        2.1.2 建庫(kù)實(shí)驗(yàn)步驟
        2.1.3 上機(jī)測(cè)序
        2.1.4 mRNA建庫(kù)及測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程
    2.2 非編碼RNA建庫(kù)及測(cè)序流程
        2.2.1 標(biāo)本采集、總RNA的提取、質(zhì)量檢測(cè)
        2.2.2 離子打斷
        2.2.3 cDNA的合成
        2.2.4 文庫(kù)質(zhì)檢、文庫(kù)的稀釋與混合
        2.2.5 利用Hiseq平臺(tái)上機(jī)測(cè)序
    2.3 測(cè)序結(jié)果按照如下流程進(jìn)行生物信息分析
第3章 結(jié)果
    3.1 編碼RNA測(cè)序結(jié)果
        3.1.1 研究對(duì)象的臨床特征
        3.1.2 質(zhì)量評(píng)估
        3.1.3 基因差異表達(dá)分析
        3.1.4 差異表達(dá)基因GO功能分析
        3.1.5 差異表達(dá)基因KEGG功能分析
    3.2 非編碼RNA測(cè)序結(jié)果
        3.2.1 測(cè)序質(zhì)量評(píng)估
        3.2.2 miRNA表達(dá)量
        3.2.3 lncRNA的篩選情況
        3.2.4 miRNA、lncRNA差異表達(dá)分析
        3.2.5 miRNA、lncRNA靶基因預(yù)測(cè)
        3.2.6 miRNA、lncRNA靶基因GO功能分析
        3.2.7 miRNA、lncRNA靶基因KEGG功能分析
        3.2.8 microRNA結(jié)合位點(diǎn)分析
    3.3 糖尿病足發(fā)病機(jī)制可能的ce RNA機(jī)制
        3.3.1 lncRNA差異表達(dá)分析
        3.3.2 miRNA差異表達(dá)分析
        3.3.3 mRNA差異表達(dá)分析
        3.3.4 對(duì)lnc RNA-mi RNA-m RNA做WGCNA共表達(dá)分析,尋找其網(wǎng)絡(luò)關(guān)系
    3.4 MMP9 抑制糖尿病足的發(fā)生發(fā)展
第4章 討論
第5章 結(jié)論
第6章 展望與不足
    6.1 創(chuàng)新性
    6.2 不足
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào):3197299

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