發(fā)布時(shí)間：2021-05-17 04:00

　　目的:通過(guò)二代高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)橋本甲狀腺炎（Hashimoto’s thyroiditis,HT）患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）miRNAs的表達(dá)譜進(jìn)行分析,運(yùn)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)分析,篩選出與HT發(fā)病相關(guān)的miRNAs進(jìn)行驗(yàn)證,并進(jìn)一步研究其調(diào)控機(jī)制;探討miRNA作為HT潛在生物標(biāo)志物可能性,為HT的臨床診治提供新思路。方法:1、運(yùn)用二代高通量測(cè)序技術(shù)分別檢測(cè)5例HT患者和5例健康志愿者PBMCs中的RNA并構(gòu)建測(cè)序文庫(kù),利用生物信息學(xué)進(jìn)行計(jì)算分析得出,獲得miRNAs差異表達(dá)譜。2、從miRNAs的表達(dá)譜中挑選出與HT發(fā)病機(jī)制可能相關(guān)且具有一定研究?jī)r(jià)值的六個(gè)miRNAs,擴(kuò)大樣本量,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）技術(shù)驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果。3、運(yùn)用基因本體論（Gene Ontology,GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes and Geno... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要英文縮略詞
第一章 緒論
    1.1 橋本甲狀腺炎
        1.1.1 橋本甲狀腺炎簡(jiǎn)介
        1.1.2 橋本甲狀腺炎的發(fā)病機(jī)制
    1.2 Th1 細(xì)胞
        1.2.1 Th細(xì)胞分類
        1.2.2 Th1 細(xì)胞的分化與功能
        1.2.3 Th1 細(xì)胞與自身免疫性疾病
    1.3 miRNA
        1.3.1 miRNA的合成及生物學(xué)功能
        1.3.2 miRNA與免疫系統(tǒng)
        1.3.3 miRNA與自身免疫性疾病
    1.4 高通量測(cè)序
    1.5 本研究的目的、方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及意義
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.5.4 研究意義
第二章 橋本甲狀腺炎與健康對(duì)照組之間差異表達(dá)的miRNA表達(dá)譜的構(gòu)建與分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        2.1.1 研究對(duì)象
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 材料和試劑
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離
        2.2.2 PBMCs中的總RNA的提取
        2.2.3 RNA質(zhì)量檢測(cè)及RNA文庫(kù)質(zhì)控
        2.2.4 miRNA測(cè)序文庫(kù)及測(cè)序
        2.2.5 miRNA高通量測(cè)序及數(shù)據(jù)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 RNA樣本質(zhì)控結(jié)果
        2.3.2 高通量測(cè)序結(jié)果
    2.4 討論
第三章 HT患者與健康志愿者中差異表達(dá)的miRNAs的表達(dá)驗(yàn)證
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        3.1.1 研究對(duì)象
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑及材料
        3.1.4 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 分離外周血單個(gè)核細(xì)胞
        3.2.2 qRT-PCR檢測(cè)PBMC中 miRNAs的表達(dá)
        3.2.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 HT患者與健康志愿者之間差異表達(dá)miRNAs
        3.3.2 qRT-PCR檢測(cè)差異表達(dá)的miRNAs在 PBMCs中相對(duì)表達(dá)量
    3.4 討論
第四章 HT患者與健康志愿者之間差異表達(dá)的miRNAs的生物學(xué)功能研究的預(yù)測(cè)
    4.1 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 HT患者中差異表達(dá)的miRNAs的靶基因的GO分析
        4.2.2 HT患者中差異表達(dá)的miRNAs靶基因的KEGG Pathway分析
    4.3 討論
第五章 橋本甲狀腺炎患者miR-125a-5p作用機(jī)制的研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        5.1.1 研究對(duì)象
        5.1.2 miRNAs靶向關(guān)系預(yù)測(cè)軟件
        5.1.3 細(xì)胞株及菌種
        5.1.4 主要儀器
        5.1.5 主要試劑及材料
        5.1.6 主要溶液配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 預(yù)測(cè)和篩選miRNAs的調(diào)控的靶基因
        5.2.2 分離外周血單個(gè)核細(xì)胞
        5.2.3 FCM檢測(cè)Th1 細(xì)胞亞群
        5.2.4 qRT-PCR檢測(cè)PBMC中 MAF、IFNG的表達(dá)
        5.2.5 分選人外周血PBMCs中的CD4+細(xì)胞
        5.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.2.7 熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建
        5.2.8 Dual-Luciferase報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.9 qRT-PCR檢測(cè)甲狀腺組織中miR-125a-5p、IFNG、MAF的表達(dá)水平
        5.2.10 血清中TgAb、TPOAb的檢測(cè)
        5.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 miRNAs靶基因的預(yù)測(cè)
        5.3.2 HT組與健康對(duì)照組外周血PBMC中的MAF表達(dá)情況
        5.3.3 雙熒光素酶報(bào)告分析miR-125a-5p與 MAF的相互作用
        5.3.4 外周血PBMCs中 miR-125a-5p對(duì) MAF的調(diào)控作用
        5.3.5 HT患者與健康志愿者PBMCs中 Th1 細(xì)胞比例變化
        5.3.6 HT患者與健康志愿者PBMCs中 IFNG mRNA相對(duì)表達(dá)量
        5.3.7 HT患者PBMCs中 miR-125a-5p表達(dá)水平與Th1 細(xì)胞比例及相關(guān)因子相關(guān)性分析
        5.3.8 健康志愿者外周血CD4+細(xì)胞中miR-125a-5p對(duì) Th1 細(xì)胞的調(diào)控作用
        5.3.9 HT患者中miR-125a-5p與甲狀腺自身抗體的關(guān)系
        5.3.10 局部甲狀腺組織標(biāo)本中miR-125a-5p、MAF及 IFNG表達(dá)情況
        5.3.11 miR-125a-5p在 HT中的潛在診斷價(jià)值
    5.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3191028