發(fā)布時(shí)間：2021-05-15 22:49

　　目的:至今為止,世界上仍有數(shù)以百萬計(jì)的人群暴露于矽塵環(huán)境,矽塵主要經(jīng)呼吸道進(jìn)入肺臟,可導(dǎo)致不可逆的矽肺病,其主要以肺部炎癥、矽結(jié)節(jié)和肺部纖維化為主要特點(diǎn)。然而,更讓人們不能忽視的是,接觸游離性二氧化硅還可以促發(fā)機(jī)體產(chǎn)生各種類型的自身免疫性疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì),矽塵暴露者易并發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、Caplan綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）等自身免疫性疾病。矽塵暴露引發(fā)自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制,目前仍不十分清楚。新近研究發(fā)現(xiàn),免疫細(xì)胞的異常凋亡和LC3相關(guān)吞噬作用（LAP）,在自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。本研究應(yīng)用矽塵暴露的MRL/lpr狼瘡小鼠模型探討機(jī)體免疫細(xì)胞凋亡及LAP在矽塵促發(fā)自身免疫性疾病中的作用及薯蕷皂苷阻抑矽塵促發(fā)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制,這將為該類疾病的預(yù)防與治療提供新的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。研究方法:本研究通過非暴露式氣管灌注二氧化硅懸液,構(gòu)建MRL/lpr小鼠矽塵暴露模型,以同樣的方法構(gòu)建對(duì)照組模型,并給予實(shí)驗(yàn)小鼠80 mg/kg的薯蕷皂苷（dioscin）或羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）。本研究將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為生理鹽水組（saline+CMC-Na）... 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 主要試劑的配置
        2.2.1 10 %水合氯醛
        2.2.2 1%紅細(xì)胞裂解液
        2.2.3 4%多聚甲醛
        2.2.4 1%多聚甲醛
        2.2.5 10×電泳緩沖液(Westernblotrunningbuffer)
        2.2.6 10×轉(zhuǎn)膜液(Westernblottrans-buffer)
        2.2.7 10 ×TBS
        2.2.8 1%TBST
        2.2.9 封閉液
        2.2.10 1%雜交液
        2.2.11 10%SDS溶液
        2.2.12 完全細(xì)胞培養(yǎng)基
    2.3 研究對(duì)象與分組
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.3.2 動(dòng)物分組及模型的建立
    2.4 小鼠樣品的取留
        2.4.1 小鼠尿液的收集
        2.4.2 小鼠血清的收集
        2.4.3 小鼠肺泡灌洗液(Bronchoalveolarlavagefluid,BALF)的制備
        2.4.4 小鼠肺組織樣本的取留
        2.4.5 脾細(xì)胞單細(xì)胞懸液制備
        2.4.6 腎臟組織懸液制備
    2.5 組織學(xué)檢測(cè)
        2.5.1 蘇木素伊紅染色(hematoxylin-eosinstaining,HE)
        2.5.2 免疫熒光染色(Immunofluorescence,IF)
    2.6 小鼠BALF中炎性細(xì)胞涂片
        2.6.1 小鼠BALF中炎性細(xì)胞涂片
    2.7 自身抗體檢測(cè)
        2.7.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)
    2.8 腎功能檢測(cè)
        2.8.1 考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法)測(cè)定尿蛋白
        2.8.2 肌氨酸氧化酶法測(cè)定肌酐
        2.8.3 尿蛋白肌酐比值
    2.9 細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)
        2.9.1 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.9.2 流式細(xì)胞術(shù)
    2.10 蛋白定量和Westernblot檢測(cè)
        2.10.1 蛋白定量
        2.10.2 westernblot檢測(cè)
    2.11 總RNA提取和Real-timePCR檢測(cè)
        2.11.1 總RNA提取
        2.11.2 mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA
        2.11.3 Realtime-PCR檢測(cè)
    2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 薯蕷皂苷可減輕矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠的肺部炎癥
    3.2 薯蕷皂苷可降低矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠血清中自身抗體水平
    3.3 薯蕷皂苷可改善矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠腎臟功能,減輕腎臟炎癥及免疫復(fù)合物沉積
        3.3.1 薯蕷皂苷可降低矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠尿蛋白肌酐比值及血清肌酐水平
        3.3.2 薯蕷皂苷可減輕矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠腎臟炎癥和免疫復(fù)合物的沉積
    3.4 薯蕷皂苷可降低矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠機(jī)體免疫細(xì)胞的凋亡水平,促進(jìn)腎臟免疫細(xì)胞LAP功能
        3.4.1 薯蕷皂苷可降低矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠機(jī)體免疫細(xì)胞的凋亡水平
        3.4.2 薯蕷皂苷可促進(jìn)矽塵暴露的狼瘡傾向小鼠腎臟免疫細(xì)胞LAP功能
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Traditional Chinese herbal extracts inducing autophagy as a novel approach in therapy of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Cong Liu,Jia-Zhi Liao,Pei-Yuan Li.  World Journal of Gastroenterology. 2017(11)



本文編號(hào)：3188474