類風濕性關(guān)節(jié)炎是一種長期發(fā)作的與慢性炎癥相關(guān)的自身免疫病。目前的治療策略主要是抑制疾病發(fā)生過程中的過強免疫反應(yīng),如利用小分子免疫抑制劑氨甲喋呤、來氟米特,或是采用近年來興起的抗體療法如阿達木單抗等抑制炎癥反應(yīng),從而緩解疾病的癥狀。但長期使用上述治療方法所導(dǎo)致全身性免疫抑制會致使治療后期感染風險增加,因而開發(fā)新的類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療策略成為一項挑戰(zhàn)。小干擾RNA（small-interfering RNA,siRNA）作為一種有效的基因沉默手段,在近年來受到越來越多的關(guān)注和使用,但與此同時,siRNA的應(yīng)用也存在著重大的問題,如其在體內(nèi)易被核酸酶降解等。實驗室之前開發(fā)了一種利用聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PEG-b-PLGA）輔以陽離子脂質(zhì)（如DOTAP和BHEM-Chol等）,通過兩次乳化法包載siRNA的方法,將包載的納米顆粒成功遞送至靶細胞并沉默相關(guān)基因的表達。這一陽離子脂質(zhì)輔助的納米顆粒已在多種疾病模型中取得了較好的治療效果。布魯頓氏酪氨酸激酶（BTK）在B細胞的成熟和巨噬細胞的炎癥反應(yīng)中起著重要作用。有研究表明,通過小分子抑制劑抑制B細胞與巨噬細胞中的BTK表達,能有效的... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 siRNA的發(fā)現(xiàn)與作用機制
    1.2 siRNA藥物的優(yōu)勢與面臨的挑戰(zhàn)
        1.2.1 siRNA藥物的優(yōu)勢
        1.2.2 siRNA藥物面臨的挑戰(zhàn)
    1.3 siRNA藥物遞送系統(tǒng)
        1.3.1 陽離子細胞穿透肽
        1.3.2 樹枝狀載體
        1.3.3 聚合物載體
        1.3.4 脂質(zhì)類載體
    1.4 B細胞、巨噬細胞的功能與疾病
        1.4.1 B細胞的發(fā)育與功能
        1.4.2 B細胞的功能與疾病
        1.4.3 巨噬細胞的功能與疾病
    1.5 布魯頓氏酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase,BTK)
    1.6 類風濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)
    1.7 本課題的選題目的及主要研究內(nèi)容
    參考文獻
第二章 實驗材料與實驗方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 聚合物材料及脂質(zhì)
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要設(shè)備
        2.1.4 實驗小鼠
    2.2 實驗方法
        2.2.1 遞送siRNA納米顆粒的制備
        2.2.2 遞送siRNA納米顆粒性質(zhì)的表征
        2.2.3 納米顆粒中siRNA回收率和包載率檢測
        2.2.4 納米顆粒穩(wěn)定性檢測
        2.2.5 納米顆粒對siRNA保護檢測
        2.2.6 RAW264.7細胞培養(yǎng)
        2.2.7 骨髓來源巨噬細胞(bone-marrow-derived macrophages,BMDMs)培養(yǎng)
        2.2.8 小鼠脾臟細胞培養(yǎng)
        2.2.9 流式細胞術(shù)(FACS)檢測納米顆粒在不同臟器中的B細胞、巨噬細胞和中性粒細胞中的分布
        2.2.10 血液中淋巴細胞的分離
        2.2.11 腹腔灌洗液中淋巴細胞的分離
        2.2.12 淋巴結(jié)中淋巴細胞的分離
        2.2.13 脾臟中淋巴細胞的分離
        2.2.14 FACS檢測B細胞對納米顆粒的體外攝取
        2.2.15 FACS檢測巨噬細胞對納米顆粒的體外攝取
        2.2.16 共聚焦顯微鏡(CLSM)觀察RAW264.7細胞對納米顆粒的體外攝取
        2.2.17 RAW264.7細胞體外敲低BTK實驗檢測
        2.2.18 BMDM體外敲低BTK實驗檢測
        2.2.19 脾臟中B細胞體外敲低BTK實驗檢測
        2.2.20 體內(nèi)敲低BTK實驗檢測
        2.2.21 小鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎模型的構(gòu)建
        2.2.22 小鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎模型的治療與檢測
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 表面不同表面特性納米顆粒庫的構(gòu)建
    3.2 篩選不同特性納米顆粒在B細胞、巨噬細胞和中性粒細胞中的分布
    3.3 篩選得到的納米顆粒進一步表征
    3.4 B細胞與巨噬細胞對包載Cy5-siRNA納米顆粒(CLAN_(Cy5-siRNA))的體外攝取
    3.5 CLAN_(siBTK)體外敲低B細胞與巨噬細胞中BTK表達
    3.6 CLAN_(siBTK)體外敲低模擬炎癥環(huán)境中巨噬細胞BTK的表達
    3.7 B細胞與巨噬細胞對CLAN_(Cy5-siRNA)的體內(nèi)攝取
    3.8 CLAN_(siBTK)體內(nèi)敲低B細胞與巨噬細胞中BTK表達
    3.9 CLAN_(siBTK)緩解小鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎癥狀
    3.10 結(jié)論
參考文獻
附錄一 主要溶液配制
附錄二 常規(guī)實驗方法
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號：3167094