目的:煙曲霉是臨床上最常見的機會性致病真菌之一,可在免疫功能低下的患者中引起致命的侵襲性曲霉病。糖尿病已成為曲霉菌感染的危險因素之一。糖尿病患者中侵襲性肺曲霉病的發(fā)生率甚至比免疫功能低下的患者更高。在高血糖狀態(tài)下,感染會引起細(xì)胞因子的水平升高,而后者又會引起胰島素抵抗,進(jìn)而導(dǎo)致惡性循環(huán),并加劇感染的嚴(yán)重程度。在煙曲霉感染部位通常會形成缺氧的微環(huán)境。作為缺氧環(huán)境的核心因素,轉(zhuǎn)錄因子缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）被激活并在抗真菌免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。已有研究表明,在高血糖狀態(tài)下,HIF-1α被抑制且能引發(fā)功能障礙。因此,HIF-1α的抑制作用可能是導(dǎo)致感染惡化的重要因素。但是機制仍不清楚。已有證據(jù)表明,HIF-1α在調(diào)節(jié)免疫和炎癥中發(fā)揮著重要作用,其能夠有效的幫助宿主防御感染。然而,HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在糖尿病患者合并肺煙曲霉菌感染中的作用仍是未知的。本研究課題旨在通過臨床病例回顧性研究以及建立糖尿病合并肺煙曲霉菌感染小鼠模型來探究其感染特征并探討HIF-1α在糖尿病合并肺煙曲霉菌感染中發(fā)揮作用的內(nèi)在機制,進(jìn)而為糖尿病患者合并肺煙曲霉菌感染的治療提供新的理論依據(jù)。方法:1.探究... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :探究糖尿病合并肺煙曲霉菌感染的感染特點以及HIF-1α的表達(dá)情況
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 臨床研究對象
        2.2 實驗動物
        2.3 主要試劑和儀器
            2.3.1 主要試劑
            2.3.2 主要儀器
        2.4 溶液和藥物配制
            2.4.1 實驗藥物
            2.4.2 免疫熒光實驗溶液
            2.4.3 免疫印跡實驗溶液
        2.5 實驗方法
            2.5.1 臨床回顧性研究數(shù)據(jù)納入與分析
            2.5.2 糖尿病小鼠模型建立
            2.5.3 小鼠肺煙曲霉菌感染模型建立
            2.5.4 組織取材及切片
            2.5.5 肺組織勻漿菌落計數(shù)
            2.5.6 肺部煙曲霉菌抗原免疫熒光染色
            2.5.7 血清煙曲霉抗原檢測
            2.5.8 HE染色步驟
            2.5.9 血清炎癥因子檢測
            2.5.10 肺組織HIF-1α蛋白表達(dá)情況檢測
            2.5.11 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 臨床回顧性研究分析結(jié)果
            3.1.1 兩組患者基礎(chǔ)情況的對比分析
            3.1.2 不同因素對住院時長的影響
            3.1.3 多因素分析
        3.2 實驗小鼠一般情況觀察
        3.3 實驗小鼠孢子清除能力評估
            3.3.1 肺組織勻漿菌落計數(shù)
            3.3.2 肺組織煙曲霉抗原免疫熒光染色
            3.3.3 血清煙曲霉抗原ELISA檢測
        3.4 實驗小鼠炎癥反應(yīng)情況評估
            3.4.1 肺組織炎癥細(xì)胞浸潤情況
            3.4.2 血清炎癥因子表達(dá)情況
        3.5 肺組織HIF-1α表達(dá)情況
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :HIF-1α在糖尿病小鼠合并肺煙曲霉菌感染中的作用及可能機制探討
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗動物
        2.2 主要試劑和儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 溶液和藥物配制
        2.4 實驗方法
            2.4.1 糖尿病小鼠模型的建立
            2.4.2 建立小鼠肺煙曲霉菌感染模型
            2.4.3 DMOG給藥模式
            2.4.4 組織取材及切片
            2.4.5 肺組織勻漿菌落計數(shù)
            2.4.6 肺部煙曲霉菌抗原免疫熒光染色
            2.4.7 血清煙曲霉抗原檢測
            2.4.8 HE染色步驟
            2.4.9 血清炎癥因子檢測
            2.4.10 肺組織HIF-1α蛋白表達(dá)情況檢測
            2.4.11 肺組織轉(zhuǎn)錄組測序
            2.4.12 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 肺組織HIF-1α表達(dá)情況
        3.2 實驗小鼠一般情況觀察
        3.3 實驗小鼠孢子清除能力評估
            3.3.1 肺組織勻漿菌落計數(shù)
            3.3.2 肺組織煙曲霉抗原免疫熒光染色
            3.3.3 血清煙曲霉抗原ELISA檢測
        3.4 實驗小鼠炎癥反應(yīng)情況評估
            3.4.1 肺組織炎癥細(xì)胞浸潤情況
            3.4.2 血清炎癥因子表達(dá)情況
        3.5 肺組織轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :高糖在缺氧環(huán)境下對煙曲霉孢子誘導(dǎo)人THP-1 巨噬細(xì)胞HIF-1α激活的影響及其下游信號通路的初步研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗細(xì)胞
        2.2 主要試劑和儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 溶液和藥物配制
            2.3.1 實驗藥物
            2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)液配制
            2.3.3 免疫印跡實驗溶液
        2.4 實驗方法
            2.4.1 細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)
            2.4.2 PMA誘導(dǎo)分化THP-1 細(xì)胞
            2.4.3 煙曲霉孢子懸液制備
            2.4.4 急性高糖刺激
            2.4.5 煙曲霉孢子與THP-1巨噬細(xì)胞低氧共培養(yǎng)
            2.4.6 高糖培養(yǎng)細(xì)胞的藥物處理
            2.4.7 巨噬細(xì)胞HIF-1α、NLRP3 蛋白表達(dá)情況檢測
            2.4.8 細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-1β的ELISA法測定
            2.4.9 流式細(xì)胞技術(shù)檢測T細(xì)胞分化比例
            2.4.10 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 巨噬細(xì)胞中HIF-1α以及NLRP3 炎癥小體信號通路表達(dá)情況
        3.2 Th細(xì)胞以及Treg細(xì)胞的分化情況
        3.3 DMOG與 Alum的應(yīng)用對HIF-1α以及NLRP3 炎癥小體的影響
        3.4 DMOG與 Alum對 Th及 Treg細(xì)胞分化的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
對本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pulmonary Immune Responses to Aspergillus Fumigatus in Rats[J]. MIRKOV Ivana,EL-MUZGHI Amal Atia Mhfuod,DJOKIC Jelena,NINKOV Marina,POPOV ALEKSANDROV Aleksandra,GLAMOCLIJA Jasmina,KATARANOVSKI Milena.  Biomedical and Environmental Sciences. 2014(09)



本文編號：3150072