目的:花粉癥是由風(fēng)媒花粉引起且主要累及呼吸道和眼部的常見的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng),具有明顯的季節(jié)性和區(qū)域性,其發(fā)病率逐年增加,嚴(yán)重影響人們身體健康,加重社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在中國北方地區(qū)由蒿屬花粉引起的花粉癥尤為突出,因此在現(xiàn)有的蒿屬花粉研究的基礎(chǔ)上,明確蒿屬植物種屬鑒定,進(jìn)一步深入分析蒿屬變應(yīng)原的免疫活性,對(duì)于中國北部地區(qū)花粉癥診治具有重要價(jià)值。方法:本研究通過花粉癥問卷調(diào)查、變應(yīng)原篩查、實(shí)地花粉和血清采集,利用現(xiàn)有的核酸序列數(shù)據(jù)庫,通過ITS序列分析及形態(tài)學(xué)進(jìn)行蒿種鑒定。通過基因合成技術(shù)合成野艾蒿花粉變應(yīng)原基因Art la 1至Art la 6。構(gòu)建本氏煙草植物、畢赤酵母和大腸桿菌蛋白表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化宿主重組表達(dá)變應(yīng)原,并進(jìn)行金屬鎳離子配體親和層析純化。最后用SDS-PAGE電泳分析、c-myc標(biāo)簽抗體及艾蒿過敏患者血清的Western Blotting檢測(cè)驗(yàn)證各重組變應(yīng)原的重組表達(dá)與lgE結(jié)合活性。結(jié)果:（1）中國北部航空兵部隊(duì)花粉癥患病率39.15%（449/1147）,SPT和血清slgE檢測(cè)結(jié)果顯示艾蒿陽性率最高,航空兵部隊(duì)陽性檢出率高達(dá)33.24%和48.84%;（2）ITS序列及形態(tài)學(xué)鑒... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

植物過表達(dá)載體pBI121-EGFP

圖 2.3 畢赤酵母蛋白分泌表達(dá)載體 pPICZɑAI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫中野艾蒿ion number:ANC85024.1)和 Art la 3.0102 (GenBank原蛋白氨基酸序列，分別去除 N 端 1-25 氨基酸氨基酸序列去除 N 端 1-21 氨基酸信號(hào)肽序列。此組表達(dá)對(duì)照蛋白。以上四個(gè)基因經(jīng)畢赤酵母密碼子)。設(shè)計(jì)上下游引物，并分別在引物 5'端引入與 p基（表 2.3）。PCR 擴(kuò)增 Art la 3.0101、Art la 3.段。反應(yīng)體系包括 25 μl HiFi 2X Master Mix、1.5的 DNA 片段模版，超純水定容至 50μl。Artla3鐘，98℃變性 20 秒，63℃退火 15 秒，72℃延伸延伸 10 秒；Artla3.0102 退火條件為 65℃15 秒；72℃延伸 30 秒；mCitrine (P. pastoris)基因 60℃退

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文GGTTCTTCGAAGATATGGCCTTATTGATGTCACGTTGTAGCCATCACCAAAAAATTAAAAAAATGCATGTCACCAAAGAATGCCACGATGTACCAGCTGGGGAACGTACCAAGGCAACCGATTCCATGAGGGCTGATGCACCACGAAAGACTTGTTAGAAAAATCTAACCCCGGAACAAAGTTCTTCAACTCACCAGTCTTGCTAA

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3128542