目的:自身免疫甲狀腺炎（Autoimmune thyroiditis,AIT）是由Th1淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病,是遺傳、環(huán)境等多因素共同作用所致的免疫穩(wěn)態(tài)失衡。碘是AIT發(fā)病的重要環(huán)境因素之一,碘過量引起甲狀腺免疫穩(wěn)態(tài)失衡,但是碘過量致甲狀腺自身免疫的始動(dòng)環(huán)節(jié)和具體機(jī)制尚不明確。有研究表明,AIM2炎癥小體在感染性疾病、腫瘤、炎癥性疾病以及自身免疫疾病等方面起重要作用,也有研究證明多種炎癥小體與AIT的發(fā)病有關(guān),證實(shí)了AIM2炎癥小體及其下游細(xì)胞因子可能代表AIT的潛在治療靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物。本文旨在利用高碘誘導(dǎo)的NOD.H-2^h4小鼠AIT模型,探究AIM2炎癥小體影響AIT發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制以及干預(yù)AIM2炎癥小體對(duì)AIT的作用。研究方法:在NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺原位注射AIM2腺相關(guān)病毒,預(yù)防性阻斷AIM2的表達(dá),再以高碘飲水喂養(yǎng)小鼠,冰凍切片HE染色鏡下觀察小鼠甲狀腺炎癥和甲狀腺腫是否有所緩解。ELISA檢測(cè)TgAb的表達(dá)量,以判斷AIT的發(fā)生情況,RT-PCR和WB檢測(cè)甲狀腺組織中AIM2炎癥小體及其下游細(xì)胞因子... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

在甲狀腺組織中AIM2的表達(dá)

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文10在NOD.H-2h4小鼠4周齡時(shí)，高碘實(shí)驗(yàn)組在小鼠的甲狀腺原位注射AIM2腺相關(guān)病毒，預(yù)防性地阻斷甲狀腺AIM2的表達(dá)，12周后檢測(cè)對(duì)AIT的影響。高碘實(shí)驗(yàn)組小鼠甲狀腺相對(duì)重量與高碘對(duì)照組相比未觀察到明顯差異（P=0.37），二組均高于正常碘組（P<0.01；P<0.01），說明高碘實(shí)驗(yàn)組甲狀腺腫的情況并未緩解。甲狀腺組織切片HE染色，顯微鏡下觀察甲狀腺組織炎癥浸潤情況并進(jìn)行炎癥評(píng)分，高碘實(shí)驗(yàn)組的小鼠甲狀腺炎癥評(píng)分（P=0.83）與高碘對(duì)照組相比無明顯差異，二組均高于正常碘組（P<0.01；P<0.01），說明甲狀腺炎癥發(fā)生情況也沒有得到明顯緩解。酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定小鼠血清中TgAb的濃度，高碘對(duì)照組較正常碘組有所增加（P=0.04），高碘實(shí)驗(yàn)組的小鼠TgAb濃度相對(duì)于高碘對(duì)照組有所降低，但沒有明顯差異（P=0.63）,相對(duì)于正常碘對(duì)照組也沒有明顯差異（P=0.13）。提示甲狀腺自身免疫未得到明顯改善，腺相關(guān)病毒特異性沉默甲狀腺AIM2的表達(dá)并未緩解NOD.H-2h4小鼠的甲狀腺腫的發(fā)生和甲狀腺炎癥嚴(yán)重程度。（表2，圖3）表2.小鼠甲狀腺原位注射AAV后甲狀腺相關(guān)指標(biāo)變化n甲狀腺相對(duì)重量（1/10000）甲狀腺評(píng)分血清TgAb濃度CON110.66±0.150.59±0.430.26±0.03H-CON93.16±1.053.00±1.090.39±0.17H-AIM2102.81±1.142.90±1.260.36±0.17P1<0.01<0.010.04P2<0.01<0.010.13P30.370.830.63(表示形式：均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，P1:CONv.s.H-CON;P2:CONv.s.H-AIM2;P3:H-CONv.s.H-AIM2)圖3.小鼠甲狀腺原位注射AAV后甲狀腺相關(guān)指標(biāo)變化

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文11圖4.甲狀腺組織HE染色(光鏡，×200)3.3小鼠甲狀腺原位注射AAV-shRNA-AIM2沉默甲狀腺AIM2的表達(dá)對(duì)脾臟Th1和Th17的影響高碘實(shí)驗(yàn)組在NOD.H-2h4小鼠4周齡時(shí)在甲狀腺原位注射AIM2腺相關(guān)病毒，預(yù)防性地阻斷甲狀腺AIM2的表達(dá)，12周后檢測(cè)對(duì)脾臟Th1和Th17的影響。提取小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞的比例。與正常碘組相比，高碘對(duì)照組小鼠Th1細(xì)胞減少(P=0.04)，Th17細(xì)胞增加(P<0.01)；高碘實(shí)驗(yàn)組的Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞比例與正常碘組無明顯差異(P=0.23；P=0.25)；高碘實(shí)驗(yàn)組較高碘對(duì)照組的Th17細(xì)胞比例下降(P<0.01)。說明甲狀腺炎癥發(fā)生時(shí)Th1細(xì)胞減少，Th17細(xì)胞增多，甲狀腺原位沉默AIM2的表達(dá)可以降低Th17細(xì)胞的比例，但未觀察到Th1細(xì)胞比例的明顯變化。（表3，圖5）A.炎癥評(píng)分1分B.炎癥評(píng)分2分C.炎癥評(píng)分3分D.炎癥評(píng)分4分


本文編號(hào)：3072295