目的:通過觀察含茶血清干預(yù)前后海馬神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化,并同時檢測海馬神經(jīng)細(xì)胞活性、損傷程度、凋亡水平及Bcl-2、Bax的表達(dá)水平,探討含茶血清對高糖誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。方法:1.制備空白血清和含茶血清,在高效液相色譜法方法學(xué)建立的基礎(chǔ)上測定血清中茶葉10種成分的含量,采用維持培養(yǎng)基按倍比稀釋的方法分別配制低、中、高濃度（25%、50%、100%）空白血清和含茶血清。2.海馬神經(jīng)細(xì)胞的原代培養(yǎng)及純度:原代培養(yǎng)出生24h以內(nèi)SD乳鼠的海馬神經(jīng)細(xì)胞,采用葡萄糖濃度為25mmol/L的培養(yǎng)基培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)至第5d,NSE免疫組化染色鑒定其純度。3.細(xì)胞分組及藥物干預(yù):將細(xì)胞隨機(jī)分為8組,分別為對照組,高糖組,低、中、高濃度空白血清組和低、中、高濃度含茶血清組,其中對照組的葡萄糖濃度為25mmol/L,高糖組的葡萄糖濃度全量換為45mmol/L,低、中、高濃度空白血清組按總體積的10%加入事先稀釋好的低、中、高濃度空白血清并且葡萄糖濃度全量換為45mmol/L,低、中、高濃度含茶血清組按總體積的10%加入配制的低、中、高濃度含茶血清并且葡萄糖濃度全量換為45mmol/L,繼續(xù)培養(yǎng)48... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

空白血清(A)、混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(B)、含茶血清樣品(C)的HPLC色譜圖

圖 2-2 海馬神經(jīng)細(xì)胞純度鑒定結(jié)果（×200）Fig 2-2 Result of purity identification of hippocampal neurons （×200）2.2.2 電鏡觀察海馬神經(jīng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)對照組海馬神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)豐富且分布均勻，核仁明顯，胞漿內(nèi)含有較多形態(tài)正常的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖 2-3-A）與對照組比較，高糖組核內(nèi)染色質(zhì)分布不均、顆�；�、凝集成塊并邊集，無核仁，胞漿內(nèi)含有較多腫脹的線粒體，呈囊泡化擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖 2-3-B）與高糖組比較，低、中、高濃度空白血清組的細(xì)胞結(jié)構(gòu)均無明顯差異，細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)顆�；⒛蓧K并邊集，無核仁，胞漿內(nèi)含有較多腫脹的線粒體，呈囊泡化擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖 2-3-C、D、E）與高糖組比較，低濃度含茶血清組神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)無明顯改善，細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)顆�；�、凝集成塊并邊集，無核仁，胞漿內(nèi)含有較多腫脹的線粒體，呈囊泡化擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，同時也含有較少形態(tài)正常的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖

胞漿內(nèi)含有較多腫脹的線粒體，呈囊泡化擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，同時也含有較少形態(tài)正常的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖2-3-F）；中、高濃度含茶血清組神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)均有不同程度的改善，中濃度含茶血清組神經(jīng)細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)豐富且分布均勻，核仁明顯，胞漿內(nèi)可見較少的形態(tài)正常的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體（圖 2-3-G）；而高濃度含茶血清組神經(jīng)細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)豐富且分布均勻，核仁明顯，胞漿內(nèi)可見較多的形態(tài)正常的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，結(jié)果表明含茶血清對高糖誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)異常具有保護(hù)作用，并且具有劑量依賴性（圖 2-3-H）。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3067785