目的:骨質(zhì)疏松是由多種因素引起的骨量降低的代謝性骨病,臨床表現(xiàn)易發(fā)生骨折及骨骼疼痛。隨著人口老齡化的發(fā)展趨勢(shì),骨質(zhì)疏松的發(fā)病率及病死率逐年上升,給每個(gè)家庭和國(guó)家?guī)淼慕?jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)也越來越大。原發(fā)性骨質(zhì)疏松患者中,絕經(jīng)后女性的患病率為男性的4倍,婦女由開始絕經(jīng)起,因雌二醇程度下降,致使骨量損失增加,骨質(zhì)疏松比例也明顯提高,其重要的治療方法之一就是補(bǔ)充外源性雌激素。雌激素水平下降是女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的主要原因。雌激素是一類有普遍生物活性的類固醇化合物,她有促成和維持女性生殖器和第二性征的生理功用,它對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)、骨骼的生長(zhǎng)與成熟、心血管體系、四肢代謝、皮膚等方面都有重要作用。已有研究表明,雌激素主要通過直接方式與成骨細(xì)胞結(jié)合影響其增值代謝,然而對(duì)于破骨細(xì)胞的作用則是通過作用于成骨細(xì)胞使其分泌Fasl,Fas/Fasl途徑經(jīng)過旁分泌的形式結(jié)合破骨細(xì)胞誘導(dǎo)破骨細(xì)胞的凋亡。因此,我們選擇了MC3T3-E1鼠成骨細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,來驗(yàn)證雌二醇對(duì)骨代謝的作用。成骨細(xì)胞凋亡已經(jīng)證實(shí)是骨質(zhì)疏松發(fā)病的重要原因,而同樣作為細(xì)胞終末調(diào)節(jié)途徑的自噬在骨質(zhì)疏松中的作用一直未被研究清楚,因此本實(shí)驗(yàn)旨在研究雌激素對(duì)成骨... 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

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圖 3.1 雌二醇對(duì) GPR30 蛋白活性表達(dá)的影響。MC3T3-E1 細(xì)胞給予不同濃度的雌二醇處理 48 小時(shí)。A: Western blot 法測(cè)定 GPR30 蛋白表達(dá)， B: RT-PCR 法測(cè)定 GPR30 mRNA 表達(dá)。與對(duì)照組相比，* P＜0.05。3.2 MC3T3-E1 細(xì)胞中 GPR30 在最適雌二醇濃度下的表達(dá)上述實(shí)驗(yàn)證明 10-7M 雌二醇為 GPR30 表達(dá)的最佳濃度，因此接下來我們用 10-7M 的雌二醇干預(yù) MC3T3-E1 成骨細(xì)胞 48h，并應(yīng)用免疫熒光顯微鏡觀察 GPR30 的表達(dá)情況，研究結(jié)果顯示，10-7M 雌二醇處理后的 MC3T3-E1 細(xì)胞中存在 GPR30的表達(dá),并且主要在細(xì)胞膜上，細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜中也有。

圖 8.1 雌二醇引起 MC3T3-E1 細(xì)胞線粒體自噬體增多并且自噬被 G15 抑制通過透射性電子顯微鏡，查看線粒體自噬小體的形成。圖 A 為 control 組，圖 B 為加入 10-7M 雌二醇處理的 17β-E2 組，圖 C 為 17β-E2+G15 組，即加入 10-7M 雌二醇前，細(xì)胞經(jīng) G15 預(yù)處理 1h。17β-E2 組線粒體自噬體明顯高于其他兩組，而 control 組與 17β-E2+G15組無顯著性差異。圖中箭頭所示為線粒體自噬小體，N 為細(xì)胞核，放大倍數(shù)為 X12000，標(biāo)尺=2um。8.2 雌二醇及 GPR30 對(duì)線粒體蛋白及溶酶體蛋白共定位的影響Tom20 為線粒體外膜蛋白，Lamp2 為溶酶體膜蛋白，通過標(biāo)記線粒體膜蛋白與溶酶體膜蛋白共定位可以使線粒體自噬可視化。我們通過免疫熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，在 MC3T3-E1 細(xì)胞中存在 Tom20 與 Lamp2 共定位，即細(xì)胞中存在線粒體自噬。研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，僅加入 10-7M 雌二醇的 17β-E2 組


本文編號(hào)：3060121