目的前期研究表明ATP作用于P2X7R可能是誘發(fā)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作的第二信號(hào)。本研究通過(guò)建立穩(wěn)定表達(dá)P2X7R的野生型或突變體型THP-1源性單核細(xì)胞系,并在高尿酸背景下分析P2X7R的野生型和三種不同SNPs基因型的功能改變。方法慢病毒轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞,并觀察HEK-293T細(xì)胞對(duì)溴化乙錠的攝取能力從而在P2X7通道上觀察Ala 348>Thr,Glu 496>Ala和Arg 307>Gln三種不同突變體對(duì)P2X7R的影響。另外,慢病毒轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞,建立穩(wěn)定表達(dá)野生型或突變體型的THP-1細(xì)胞系,設(shè)置野生型、突變體型或空病毒型三型,每型分三組,分別加入MSU（標(biāo)記M組）、MSU+ATP（標(biāo)記MA組）,空病毒對(duì)照組（標(biāo)記C組）。PMA分別刺激三組細(xì)胞,離心撤去PMA;M組和MA組中加入MSU孵育,之后MA組中加入ATP孵育;分別收集三組細(xì)胞上清和細(xì)胞。ELISA法檢測(cè)三組上清中IL-1β蛋白表達(dá)水平,q RT-PCR檢測(cè)三組細(xì)胞IL-1β,NLRP3,ASC和Caspase-1 m RNA表達(dá)水平。SPSS軟件用于分析數(shù)據(jù),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

已轉(zhuǎn)染野生型和三種突變體型慢病毒的HEK-293T細(xì)胞對(duì)溴化乙錠攝取的平均熒光強(qiáng)度的對(duì)比

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文32圖2.在Ala348>Thr,Glu496>Ala和Arg307>Gln突變體型中IL-1β表達(dá)水平的比較(A)Ala348>Thr野生型和空病毒型上清液IL-1β表達(dá)水平比較.(B)Ala348>Thr野生型和空病毒型中IL-1βmRNA表達(dá)水平比較.(C)Glu496>Ala野生型和空病毒型中上清液IL-1β表達(dá)水平比較.(D)Glu496>Ala野生型和空病毒型中IL-1βmRNA表達(dá)水平比較.(E)Arg307>Gln野生型和空病毒型中上清液IL-1β表達(dá)水平比較.(F)Arg307>Gln野生型和空病毒型中IL-1βmRNA表達(dá)水平比較.Fig2.ComparisonoftheIL-1βlevelsinAla348toThr,Glu496toAlaandArg307toGlnmutations(A)ComparisonoftheIL-1βlevelsinAla348toThr,wide-typeandemptyvirusinserum.(B)ComparisonoftheIL-1βmRNAexpressionsinAla348toThr,wide-typeandemptyvirus.(C)ComparisonoftheIL-1βlevelsinGlu496toAla,wide-typeandemptyvirusinserum.(D)ComparisonoftheIL-1βmRNAexpressionsinGlu496toAla,wide-typeandemptyvirus.

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文34圖3.在Ala348>Thr,Glu496>Ala和Arg307>Gln突變體型中NLRP3基因表達(dá)水平比較(A)Ala348>Thr野生型和空病毒型中NLRP3mRNA表達(dá)水平比較.(B)Glu496>Ala野生型和空病毒型中NLRP3mRNA表達(dá)水平比較.(C)Arg307>Gln野生型和空病毒型中NLRP3mRNA表達(dá)水平比較.Fig3.ComparisonofthegeneexpressionofNLRP3inAla348toThr,Glu496toAlaandArg307toGlnmutations(A)ComparisonofthemRNAexpressionofNLRP3inAla348toThr,wide-typeandemptyvirus.(B)ComparisonofthemRNAexpressionofNLRP3inGlu496toAla,wide-typeandemptyvirus.(C)ComparisonofthemRNAexpressionofNLRP3inArg307toGln,wide-typeandemptyvirus.*p<0.05,***p<0.001.3.4攜帶不同突變體的THP-1細(xì)胞中ASC的mRNA表達(dá)水平在高尿酸背景下，分別檢測(cè)THP-1細(xì)胞中ASC的mRNA表達(dá)水平。在MA組中，Ala348>Thr突變體型細(xì)胞中的ASC基因mRNA表達(dá)水平相比野生型，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Ala348>Thr突變體型細(xì)胞中的ASC


本文編號(hào)：3057243