發(fā)布時間：2021-02-27 03:26

　　背景:自2000年埃德蒙頓方案提出以來,胰島移植已取得了巨大成功,由于肝臟是具有雙重血供并參與血糖調(diào)節(jié)的重要器官,臨床上90%的胰島移植是將胰島經(jīng)門靜脈途徑注入肝內(nèi)。然而,通過門靜脈途徑進(jìn)行胰島移植存在一些缺陷,包括因立即血液介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)（IBMIR）造成的早期移植物丟失、門靜脈出血和肝臟栓塞的風(fēng)險、不便于對移植物進(jìn)行活檢和影像監(jiān)測等,這些問題促使了探索更加理想的替代胰島移植部位的必要性。目的:1、探索構(gòu)造小鼠肝內(nèi)竇道作為胰島移植部位的可行性;2、觀察小鼠肝內(nèi)竇道胰島移植后糖尿病小鼠血糖變化情況。方法:1、通過膽總管逆行灌注膠原酶、水浴靜止消化小鼠胰腺、Ficoll密度梯度離心結(jié)合手撿法純化胰島,采用雙硫腙（DTZ）染色鑒定胰島,吖啶橙-溴化乙錠（AO-EB）染色評價胰島活性,葡萄糖刺激試驗(yàn)（GSIS）評估胰島功能;2、利用鏈脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射法誘導(dǎo)建立糖尿病模型,在小鼠肝臟實(shí)質(zhì)內(nèi)臨時性植入尼龍棒構(gòu)造肝內(nèi)竇道;3、通過胰島移植后非禁食血糖值監(jiān)測和腹腔葡萄糖耐量試驗(yàn)評估胰島移植物功能;4、通過組織切片HE染色、Masson’s染色、免疫熒光或組化染色觀察移植物組織形態(tài)學(xué)特... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠胰島分離純化

圖 2 小鼠胰島葡萄糖刺激胰島素釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果糖 2.7mmol/L 和高糖 16.7mmol/L 培養(yǎng)基環(huán)境中3 討論純化是從事胰島移植研究必備的一項(xiàng)入門培養(yǎng)、功能鑒定、移植等一系列實(shí)驗(yàn)研究步驟較為繁多，其中許多關(guān)鍵步驟對于初灌注情況、膠原酶的濃度、PH 和消化時間

圖 3 小鼠肝內(nèi)竇道的構(gòu)造及其組織病理形態(tài)圖 A 為尼龍棒的形態(tài)；圖 B 顯示尼龍棒成功植入后，肝葉無活動性出血及明顯缺血改變；圖 C 顯示尼龍棒植入 28 天后再次開腹，腹腔內(nèi)無明顯粘連，小鼠肝左葉表面無壞死、膿腫等表現(xiàn)，尼龍棒位置無明顯移位，透過肝臟被膜可見植入的尼龍棒的頭端；圖 D 顯示通過撕裂局部肝臟被膜并拔出尼龍棒后，可形成內(nèi)壁光滑的肝內(nèi)竇道；圖 E 為肝內(nèi)竇道水平截面HE 染色，可見肝內(nèi)竇道位于肝臟實(shí)質(zhì)中，周圍被肝血竇及正常形態(tài)的肝細(xì)胞環(huán)繞，圖標(biāo)長度代表 100μm；圖 F 為肝內(nèi)竇道水平截面 Masson’s 染色，可見肝內(nèi)竇道壁內(nèi)襯染成藍(lán)色的膠原纖維，圖標(biāo)長度代表 100μm。3 討論目前 1 型糖尿病誘導(dǎo)方法主要包括通過注射 STZ[45]和四氧嘧啶[46]兩種藥物，經(jīng)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]經(jīng)大網(wǎng)膜生物支架胰島移植技術(shù)的探討[J]. 王樹森,裴廣輝,王金山,劉堯娟,張博雅,鄒家琦,劉蕾,淮明生,張雅敏,楊濤,王智平,鄭虹,Xiumin Xu,Camillo Ricordi,沈中陽.  實(shí)用器官移植電子雜志. 2016(06)
[2]Gastric Submucosa Is Inferior to the Liver as Transplant Site for Autologous Islet Transplantation in Pancreatectomized Diabetic Beagles[J]. 尹注增,王樹森,李強(qiáng),黃瑩,陳麗,陳剛,劉榮,王西墨.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[3]一種小鼠胰島經(jīng)門靜脈肝內(nèi)移植方法及療效評價[J]. 蔣煊,傅紅興,邱凱燕,何云強(qiáng),徐艷艷,祝青卉.  肝膽胰外科雜志. 2016(02)
[4]豬小腸黏膜下層包被共培養(yǎng)后大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞對胰島移植物的保護(hù)作用[J]. 王丹,丁小明,鄭瑾,田曉輝,李楊,王曉紅,宋煥錦,劉華,羅曉輝.  中華器官移植雜志. 2015 (12)
[5]豬胰島移植于大鼠肝包膜下人工囊腔治療糖尿病的研究[J]. 徐兵,吳林嵐,楊曉梅,黃素欽,吳開木.  中華器官移植雜志. 2015 (02)
[6]胃黏膜下胰島移植減輕移植物損傷的機(jī)制[J]. 尹注增,李佳昕,李強(qiáng),黃瑩,陳麗,王西墨.  中華肝膽外科雜志. 2014 (10)
[7]不同體重供體及理化因素對小鼠胰島分離的影響[J]. 張梅,劉超,徐書杭,劉翠萍,徐瑜,徐寬楓.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2006(08)
[8]Islet transplantation for diabetic rats through the spleen[J]. Ying Cheng, Jia-Lin Zhang, Yong-Feng Liu, Tie-Min Li and Ning Zhao Shenyang, China Organ Transplant Unit, First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2005(02)
[9]胸腺內(nèi)胰島移植的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 王國棟,陳規(guī)劃.  中華器官移植雜志. 1999(01)

博士論文
[1]去細(xì)胞化的肝臟支架在細(xì)胞移植中的應(yīng)用研究[D]. 王小軍.第三軍醫(yī)大學(xué) 2013



本文編號：3053615