發(fā)布時(shí)間：2021-01-31 14:45

　　目的:利用多種基因檢測(cè)手段探究28個(gè)Joubert綜合征家系的致病基因及變異位點(diǎn)。研究對(duì)象及方法:在全國(guó)范圍內(nèi)募集了 28個(gè)Joubert綜合征家系（共29名患者）,對(duì)患者的病例資料進(jìn)行匯總整理并對(duì)家系成員進(jìn)行提取核酸。1.利用靶向基因組測(cè)序和全外顯子組測(cè)序技術(shù)對(duì)患者基因組DNA進(jìn)行高通量測(cè)序。2.利用生物信息學(xué)方法對(duì)二代測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)、注釋、過濾,挑選出可能致病的變異位點(diǎn)。3.利用Sanger測(cè)序?qū)ψ儺愇稽c(diǎn)在患者及其直系親屬中進(jìn)行驗(yàn)證。4.進(jìn)行拷貝數(shù)變異分析檢測(cè)樣本可能存在的拷貝數(shù)變化并通過MLPA和Q-PCR的方法進(jìn)行驗(yàn)證。5.利用RT-PCR的方法在cDNA水平上驗(yàn)證剪接位點(diǎn)對(duì)剪接的影響。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)為來自24個(gè)Joubert綜合征家系的25例患者明確了致病基因和變異位點(diǎn),占比86.2%,在兩例患者中各找到一個(gè)位于已知致病基因雜合型的可能致病的變異位點(diǎn),占比6.9%,兩例患者的致病基因及位點(diǎn)尚未找到,占比6.9%。篩選出位于 CC2D2A、C5orf42、AHI1、ARMC9、CEP290、NPHP1、ARL13B、B9D2、CSPP1、INPP5E、PIBF1、RPGRIPI... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．纖毛疾病基因和表型的復(fù)雜交疊Ｍ??１．２?Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征的研究進(jìn)展??Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征（Ｊｏｕｂｅｒｔｓｙｎｄｒｏｍｅ，簡(jiǎn)稱ＪＳ，ＭＩＭ＃２１３３００）是纖毛病的典型代表，??

ｒｔ綜合征是１９６９年由Ｊｏｕｂｅｒｔ［４４］及其同事首次在一個(gè)法裔－加拿妹發(fā)現(xiàn)的。這四個(gè)患者均存在認(rèn)知障礙、共濟(jì)失調(diào)、呼吸急蝴部發(fā)育不全的異常表型。隨后在１９７７年，Ｂｏｌｔｓｈａｕｓｅｒ和Ｉｓｌｅｒ［４似臨床癥狀的患者，并將具有相同或類似這種臨床表型的這合征。后來隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展和磁共振成像技術(shù)應(yīng)用到臨察多數(shù)Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征患者的臨床病例后，Ｍａｒｉｅ［４６］發(fā)現(xiàn)在Ｊｏｕｂｅ振成像中存在普遍的異�，F(xiàn)象，即因患者小腦蚓部發(fā)育不良現(xiàn)為中后腦連接部位呈現(xiàn)“磨牙征”的現(xiàn)象，隨后將顱腦磁共”作為Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征的特征性診斷標(biāo)志。隨著對(duì)Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征ｒｔ綜合征致病機(jī)制的不斷探索，目前，己經(jīng)有相對(duì)完善的Ｊｏｕｂｅｔ主要包括：：（１）顱腦磁共振成像顯示為“磨牙征”，具體體現(xiàn)為間窩加深以及小腦上腳的抬高增粗；（２）患者存在不同程度的（３）存在嬰幼兒時(shí)期的肌張力減退；（４）下列兩項(xiàng)中至少存在一的呼吸節(jié)律異常（體現(xiàn)為呼吸急促和／或呼吸暫�；騼煞N呼吸異眼運(yùn)動(dòng)異常（包括眼球震顫和／或眼球運(yùn)動(dòng)失能）［４７］。??Ｎｏｒｍａｌ?Ｃｌａｓｓｉｃ?ＭＴＳ??

圖４．?Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征基因突變分析的技術(shù)路線??２實(shí)驗(yàn)材料和方法??２．１實(shí)驗(yàn)設(shè)備??儀器設(shè)備?生產(chǎn)商???微量移液器（２．５，１０，１００，２００，１?ＯＯＯｐＬ）?Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ??高壓蒸汽滅菌鍋（ＭＪＳ－５４Ａ）?施都凱儀器設(shè)備有限公司??恒溫金屬�。ǎ龋拢保埃埃�?杭州博日科技有限公司??高速離心機(jī)（１－１４）?Ｓｉｇｍａ??核酸蛋白定量?jī)x（Ｎａｎｏｄｒｏｐ?２０００Ｃ）?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，??ＱｕｂｉｔＲ３．０?Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ?Ｌｉｆｅ?Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｕ．Ｓ．Ａ??Ｍｉｌｌｉ－Ｑ?Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，?Ｕ．Ｓ．Ａ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]少年型腎單位腎癆Ⅰ型臨床特點(diǎn)和基因診斷[J]. 王少華,李媛媛,章友康,張建春,馬祎楠,陳文志,劉運(yùn)來.  中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志. 2017(06)
[2]細(xì)胞纖毛在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與器官發(fā)育中的作用與機(jī)制[J]. 孫建建,武子涵,鐘濤.  中國(guó)科學(xué):生命科學(xué). 2016(04)
[3]初級(jí)纖毛與Wnt信號(hào)通路相關(guān)性研究進(jìn)展[J]. 張蔓麗,盧彥平,李亞里.  遺傳. 2015(03)
[4]纖毛中Hedgehog信號(hào)調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王亞楠,鄒沙沙,李錚,胡洪亮.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(04)
[5]纖毛及纖毛相關(guān)疾病研究進(jìn)展[J]. 曹木青,潘俊敏.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2012(09)
[6]高通量測(cè)序技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 王興春,楊致榮,王敏,李瑋,李生才.  中國(guó)生物工程雜志. 2012(01)
[7]衣藻、纖毛與“纖毛相關(guān)疾病”[J]. 潘俊敏.  中國(guó)科學(xué)（C輯:生命科學(xué)）. 2008(05)



本文編號(hào)：3011078