一、研究背景類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一種可發(fā)生于任何年齡的慢性自身免疫性疾病,主要臨床表現(xiàn)為侵蝕性關(guān)節(jié)炎,基本病理表現(xiàn)為滑膜炎癥、血管翳形成,關(guān)節(jié)軟骨的侵蝕、骨的破壞,最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。其發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。成纖維樣滑膜細(xì)胞（Fibroblast-like synoviocytes,FLS）在RA中數(shù)量病態(tài)性增加,凋亡減少,形成血管翳,侵蝕軟骨,最終引起骨的破壞。在RA中,RA-FLS的激活是受多種信號通路影響,其中Wnt信號通路是近年來研究的熱點(diǎn),被認(rèn)為在RA的發(fā)生發(fā)展中起到了非常重要的作用。鋅指環(huán)指蛋白3（Zinc and ring finger 3,ZNRF3）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種Wnt通路負(fù)反饋調(diào)控蛋白,其通過泛素化降解細(xì)胞膜表面Wnt蛋白受體卷曲蛋白（Frizzled,Fz）,起到抑制Wnt信號通路活性的作用。但是目前關(guān)于ZNRF3的研究多集中于腫瘤,RA中還沒有ZNRF3的相關(guān)研究。因此,本課題觀察比較了ZNRF3在RA患者滑膜組織中的表達(dá),以及ZNRF3對于RA-FLS的生物學(xué)行為的影響,同時(shí)進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn),觀察了ZNRF3... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

組織標(biāo)本分離(二)組織的固定、包埋與切片

原代FLS細(xì)胞

和 CD29 兩種抗體。根據(jù)既往文獻(xiàn)報(bào)道 CD90 是一項(xiàng)很好的鑒別 FLS 的標(biāo)志物，它特異性表達(dá)于滑膜中的 FLS[31-33]，超過 70%的 FLS 上均有表達(dá)，可以用來區(qū)分 MLS 和FLS[31, 34, 35]。而 CD29 是人間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）和 FLS 的共同標(biāo)志物[36]，MSC 和FLS 目前尚未發(fā)現(xiàn)特異性標(biāo)志物可以區(qū)分，但是 MSC 需要在特殊的培養(yǎng)條件下才可以生存，因此我們選用 CD29 進(jìn)一步確定。若兩者陽性率大于 90%，即可認(rèn)為提取的細(xì)胞為較純化的 FLS。結(jié)果如圖 1-3，CD90 和 CD29 的雙標(biāo)陽性率為 93.2%。3、免疫熒光鑒定免疫熒光我們選擇了 Vimentin 蛋白和 CD68 抗體。Vimentin 蛋白廣泛存在于纖維細(xì)胞中，是 FLS 的陽性標(biāo)志物，許多研究選用進(jìn)行 FLS 的鑒別[37-39]。而 CD68 是巨噬細(xì)胞的特異性的表面標(biāo)志物[40]，也是FLS 的陰性標(biāo)志物，可以區(qū)分 FLS 和MLS。若 Vimentin 蛋白陽性而 CD68 陰性，則證明我們提取的是較為純化的 FLS。結(jié)果見圖 1-4。在熒光顯微鏡下觀察呈紅色熒光，絕大部分細(xì)胞表現(xiàn)為 Vimentin 蛋白陽性以及 CD68 陰性。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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