目的:隨著生物鐘節(jié)律紊亂病生理機(jī)制的逐步闡明,其與2型糖尿病發(fā)生發(fā)展過(guò)程的相關(guān)機(jī)制研究已經(jīng)成為國(guó)際研發(fā)熱點(diǎn)。有研究表明,時(shí)鐘基因在機(jī)體葡萄糖穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)過(guò)程中扮演著至關(guān)重要的角色。但分子時(shí)鐘調(diào)控節(jié)律性胰島素分泌以及維持葡萄糖生理穩(wěn)態(tài)的具體分子機(jī)制尚未完全明了。本研究主要對(duì)時(shí)鐘調(diào)控家族核心成員Clock蛋白對(duì)胰島素分泌調(diào)節(jié)的作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討。方法（1）檢測(cè)SD大鼠不同器官和組織中Clock m RNA表達(dá)水平。（2）q RT-PCR檢測(cè)INS-1細(xì)胞中Clock m RNA節(jié)律性表達(dá)。（3）q RT-PCR及Western blot檢測(cè)si RNA轉(zhuǎn)染INS-1細(xì)胞后轉(zhuǎn)染效率以及抑制Clock內(nèi)源性表達(dá)后INS-1細(xì)胞胰島素合成相關(guān)基因INS-1、INS-2 m RNA表達(dá)。（4）GSIS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抑制Clock內(nèi)源性表達(dá)后INS-1細(xì)胞胰島素分泌的變化。（5）q RT-PCR檢測(cè)INS-1細(xì)胞鈣離子通道節(jié)律性表達(dá)。（6）q RT-PCR及Western blot檢測(cè)抑制Clock內(nèi)源性表達(dá)后電壓依賴(lài)性鈣離子通道m(xù) RNA和蛋白的水平。（7）熒光探針?lè)z測(cè)抑制Clock內(nèi)源性表達(dá)后細(xì)胞內(nèi)... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)CHIP實(shí)驗(yàn)Cacna1c-1Cacna1c-2Cacna1c-3Cacna1c-4

41性 Clock 表達(dá)后的 CHIP 實(shí)驗(yàn)trl siRNA 相比，p<0.05因子 Clock 與 Cacna1c 啟動(dòng)子區(qū)位點(diǎn)的相互作 作為模板擴(kuò)增 Clock 編碼區(qū)序列，并從 HindIIINA3.1 載體上，命名為 Clock Construct；另外，

k 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒 BamHI 和 HindIII 雙酶切鑒定結(jié)果；BglII 和 KpnI 雙酶切鑒定結(jié)果 結(jié)果驗(yàn)證的結(jié)合位點(diǎn)，構(gòu)建僅包含 Cacna1c 啟動(dòng)子a1c promoter 質(zhì)粒，將構(gòu)建好的 Cacna1c promoter 質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染 293AD 細(xì)胞，結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照粒組的熒光素酶活性明顯增加，說(shuō)明構(gòu)建的 Cacna1；將 Clock 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒與 Cacna1c promoter 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)告基因結(jié)果顯示，Clock 能夠顯著的增加 Cacna1c pa1c promoter 質(zhì)粒中的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變，隨后進(jìn)一 Cacna1c promoter 突變質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，結(jié)果顯示 Cmoter 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄活性明顯減少，失去了對(duì) Clock 的 Cacna1c promoter-444~-454 位點(diǎn)區(qū)域，并調(diào)控其轉(zhuǎn)1.52.0VeClseActivity*


本文編號(hào)：3001295