目的:探討骨細(xì)胞Wnt信號通路對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）成骨分化的作用及其分子機(jī)制。方法:利用條件性基因敲出Cre/loxp技術(shù)制備特異性激活骨細(xì)胞Wnt/β-Catenin信號通路的小鼠;體外分離其與（同窩對照）小鼠的骨細(xì)胞,并分別與野生型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng);堿性磷酸酶（ALP）染色及活性定量、茜素紅（Alizarinred）染色檢測共培養(yǎng)早期成骨分化和晚期鈣鹽沉積;Real-Time PCR檢測骨細(xì)胞Notch信號配體Jag1、Jag2、Dll1、D114及共培養(yǎng)后成骨分化特異標(biāo)志物Runx2、ALP、Osteocalcin的mRNA表達(dá)水平。隨后于共培養(yǎng)中加入Notch信號通路化學(xué)抑制劑DAPT（對照組加DMSO）,再次行堿性磷酸酶（ALP）染色及活性定量和Real-Time PCR檢測成骨分化特異標(biāo)志物表達(dá)水平。結(jié)果:Wnt/β-Catenin激活的骨細(xì)胞其自身Jag1、Jag2、Dll4 mRNA表達(dá)較對照組骨細(xì)胞明顯升高（P<0.05）,與BMSCs共培養(yǎng)后成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2,成骨分化特異標(biāo)志物ALP、Osteocalcin mRNA的表達(dá)較野生型明... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：35 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小燕簽固型鑒定

成骨分化實驗于共培養(yǎng)第１０天行堿性磷酸酶（ＡＬＰ）染色、茜素紅染色及成骨分??化特異性標(biāo)志物基因水平檢測，結(jié)果顯示骨細(xì)胞Ｗｎｔ激活組相較于對照組，ＡＬＰ??活性明顯增加（圖２?（ａ）），鈣鹽沉積明顯增加（圖２?（ｂ）），成骨分化轉(zhuǎn)錄因??子Ｒｍｉｘ２ｍＲＮＡ水平增加１５０％?（圖３?（ａ）），堿性磷酸酶ｍＲＮＡ水平增加１３８％??（圖３?（ｂ））、生化活性高１６０％?（圖２?（ｃ）），骨生成代謝標(biāo)志物骨鈣蛋白的??表達(dá)多２７４％?（圖３?（ｃ））。提示骨細(xì)胞Ｗｎｔ信號促進(jìn)了?ＢＭＳＣ的成骨分化。??１?６１?０?０１５ｌ?＊?ｓ？ｒ＋Ｂ？??＊?丁??１－６－?ｔ?４－?Ｔ?０，０１－?■■??０．８２－?ｊ?Ｈ?０．００５－?■??Ｉ?ｎｌ?ｎｌ??〇?（ａ）?°?（ｂ）?°?（ｃ）??圖３成骨分化特異性標(biāo)志物ｍＲＮＡ表達(dá)情況（＊Ｐ＜０．０５）??Ｆｉｇ．３?ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｍａｋｅｒｓ?（?＊Ｐ＜０．０５）??１３??

化特異性標(biāo)志物基因水平檢測，結(jié)果顯示骨細(xì)胞Ｗｎｔ激活組相較于對照組，ＡＬＰ??活性明顯增加（圖２?（ａ）），鈣鹽沉積明顯增加（圖２?（ｂ）），成骨分化轉(zhuǎn)錄因??子Ｒｍｉｘ２ｍＲＮＡ水平增加１５０％?（圖３?（ａ）），堿性磷酸酶ｍＲＮＡ水平增加１３８％??（圖３?（ｂ））、生化活性高１６０％?（圖２?（ｃ）），骨生成代謝標(biāo)志物骨鈣蛋白的??表達(dá)多２７４％?（圖３?（ｃ））。提示骨細(xì)胞Ｗｎｔ信號促進(jìn)了?ＢＭＳＣ的成骨分化。??１?６１?０?０１５ｌ?＊?ｓ？ｒ＋Ｂ？??＊?丁??１－６－?ｔ?４－?Ｔ?０

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]下調(diào)骨細(xì)胞TGF-β/Smad4信號可抑制小鼠BMSCs成骨及破骨分化[J]. 代光明,任磊,陳虹,劉文,陳宇,何小強(qiáng),劉偉,涂小林,黃偉.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2017(06)



本文編號：2930724