目的:IL-1R相關(guān)激酶（IRAK）-M在哮喘氣道炎癥期間能夠調(diào)節(jié)肺臟免疫。然而,當氣道炎癥持續(xù)時IRAK-M的調(diào)節(jié)作用不同。IRAK-M單核苷酸多態(tài)性與兒童哮喘發(fā)病相關(guān)已有報道,但目前仍缺乏IRAK-M單核苷酸多態(tài)性與成人哮喘關(guān)系的研究。在本研究中,我們將探討IRAK-M基因組區(qū)域單核苷酸多態(tài)性在中國北方漢族成人哮喘發(fā)生中的作用及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。方法:（1）所有研究對象均來自于北京協(xié)和醫(yī)院或民航總醫(yī)院。哮喘診斷均由有經(jīng)驗的經(jīng)過統(tǒng)一培訓的呼吸內(nèi)科專家根據(jù)中華醫(yī)學會呼吸病學分會哮喘學組制定的支氣管哮喘診斷標準作出。哮喘組共納入679例中國北方漢族成人哮喘患者,對照組共納入669例健康體檢者。所有患者均需完成詳細的病史采集、肺功能檢查、血常規(guī)檢查及血清IgE檢查,并采集外周靜脈血用于基因單核苷酸多態(tài)性檢測。選取IRAM-M基因組區(qū)域9個SNP,采用SNaPshot技術(shù)進行外周血SNP分型,進行基于群體的成人哮喘遺傳易感性分析;（2）應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù),分析SNP位點rs1624395不同等位基因?qū)ο颊咄庵苎狪RAK-M mRNA表達水平的影響;（3）利用公共數(shù)據(jù)庫信息預測SNP位點... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖５．?多態(tài)性對哮喘患者外周血／見ｍＲＮＡ表達的影響??

０００?ｒｐｍ／分鐘離心２分鐘，收集濾液為回收產(chǎn)物。??ｃ－ＪｕｎＰＣＲ擴增結(jié)果：以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物ｃＤＮＡ為模板，ＰＣＲ擴増條帶大小在９９６ｂｐ??處，與預期結(jié)果一致，如圖１所示：??圖１．人源ｃ－Ｊｕｎ基因ＰＣＲ電泳圖??２．１．４目的片段與線性化原核表達載體連接??將回收后的目的片段ｃ－Ｊｕｎ與雙酶切原核表達載體ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ進行連接，??連接條件：１６°Ｃ連接４ｈ。??反應(yīng)體系?１０?ｐＬ：?２ｘＭＩＸ?５?｜ｉＬ；載體?１?ｐＬ；?ｃ－Ｊｕｎ?４?｜ａＬ，加滅菌水ｄｄ?Ｈ２０至?１０?叫。??４８??

ＰＣＲ反應(yīng)條件為：９５°Ｃ預變性１０分鐘，３５個循環(huán)（９４°Ｃ變性３０秒，６０°Ｃ退火３０??秒，７２°Ｃ延伸２分鐘），７２°Ｃ延伸１０分鐘，反應(yīng)結(jié)束后１％瓊脂糖凝膠檢測。??挑取單菌落進行ＰＣＲ鑒定，擴增條帶大小與預期結(jié)果一致，如圖２所示：??圖２．人源ｃ－Ｊｕｎ基因菌液ＰＣＲ鑒定結(jié)果??２．１．７序列測定與結(jié)果分析??原核表達載體ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ菌液ＰＣＲ鑒定陽性菌株送至生工生物進??行序列測定，測序結(jié)果與ＮＣＢＩ登陸序列進行比對，比對結(jié)果顯示表達載體構(gòu)建成??功，序列比對結(jié)果說明ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ原核表達載體構(gòu)建成功。??４９??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]我國十城市支氣管哮喘控制和疾病管理及患者認知水平的變化[J]. 林江濤,王文巧,周新,殷凱生,黃茂,劉春濤,王長征,陳萍,袁雅冬,蔡紹曦,吳昌歸,李靖,林其昌,周建英,劉輝國,顧玉海,黃信剛,孫德俊,楊曉紅,楊嵐,霍建民,陳卓昌,周瑋,蔣萍,唐華平,劉榮玉,張偉,陳一強,黃奕江,劉曉菊,戴路明,葉賢偉,胡成平,張捷,許建英.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2018 (03)
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本文編號：2907149