目的多囊卵巢綜合征目前已經(jīng)成為研究女性不孕的熱點(diǎn),已有研究表明micro RNAs在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用。研究mi R-133b在PCOS大鼠模型卵巢中的表達(dá)、對大鼠生育能力及子代鼠表型的影響,探討mi R-133b在多囊卵巢綜合征發(fā)病中的作用及相關(guān)機(jī)制,并進(jìn)一步探討PCOS是否具有遺傳傾向。方法(1)來曲唑誘導(dǎo)PCOS大鼠動(dòng)物模型,分別用mi R-133b agomir和mi R-133b antagomir干預(yù)PCOS大鼠模型,觀察PCOS疾病狀態(tài)下、經(jīng)過干預(yù)后大鼠外周血血清激素水平與卵巢組織學(xué)改變以及靶基因TAGLN2表達(dá)水平。(2)與雄鼠合籠,記錄每組大鼠的妊娠情況,計(jì)算妊娠率。(3)子鼠養(yǎng)到6周后處死,觀察子代鼠的卵巢組織學(xué)改變,mi R-133b及靶基因TAGLN2的表達(dá)水平。結(jié)果(1)光學(xué)顯微鏡下觀察,相對于對照組,PCOS組母代大鼠卵巢卵泡多呈囊性擴(kuò)張,顆粒細(xì)胞層數(shù)減少,少見各級(jí)發(fā)育期卵泡及黃體,卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失,卵巢正常結(jié)構(gòu)破壞。PM組母代大鼠卵巢內(nèi)可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體,多數(shù)卵泡為初級(jí)卵泡,顆粒細(xì)胞層排列整齊,偶可見擴(kuò)張的囊性卵泡,卵巢結(jié)構(gòu)趨于正常。PI組母代大鼠卵巢內(nèi)卵泡多呈囊性擴(kuò)張,顆粒細(xì)胞層數(shù)減少,少見各級(jí)發(fā)育期卵泡。(2)PCOS組母代大鼠血清T水平明顯高于其余三組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。而PM組母代大鼠血清T水平顯著低于PCOS組,而與對照組相比無明顯差異。PCOS組母代大鼠血清LH水平、LH/FSH水平顯著高于對照組,PM組顯著低于PCOS組,而與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。PCOS組母代大鼠血清E2水平低于其余三組。PCOS組母代大鼠血清INS水平高于其余三組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)Real-time PCR顯示相對于對照組,PCOS組母代大鼠卵巢內(nèi)mi R-133b水平顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),PM組母代大鼠卵巢內(nèi)mi R-133b水平比PCOS組明顯增加,與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。PI組大鼠的mi R-133b水平也顯著性低于對照組(P0.01)。PCOS組TAGLN2的表達(dá)水平顯著性低于對照組(P0.01)。(4)Western blot顯示與對照組相比,PCOS組母代大鼠卵巢中的TAGLN2表達(dá)水平顯著減少(P0.01)。PM組大鼠的卵巢中TAGLN2的表達(dá)水平比PCOS組升高,與對照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PI組其卵巢中的TAGLN2的表達(dá)水平也顯著降低(P0.01)。(5)經(jīng)過統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),PCOS組母代大鼠的妊娠率顯著低于對照組(33.33%vs100%,P0.01),而PM組的妊娠率高于PCOS組,與對照組無明顯差異(83.33%vs 100%,P0.05)。PI組大鼠的妊娠率明顯低于對照組(33.33%vs 100%,P0.01)。(6)對照組子代大鼠卵巢皮質(zhì)內(nèi)可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體,成熟卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞透明帶明顯,多層顆粒細(xì)胞排列整齊,卵巢組織學(xué)形態(tài)正常;PCOS組子代大鼠卵巢內(nèi)可見到多個(gè)擴(kuò)張的卵泡,卵母細(xì)胞少見或缺如,顆粒細(xì)胞層減少,少見各級(jí)發(fā)育期的卵泡,可見少數(shù)黃體;PM組子代大鼠卵巢內(nèi)可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體,顆粒細(xì)胞層排列整齊,擴(kuò)張性卵泡少見;PI組子代大鼠卵巢皮質(zhì)內(nèi)擴(kuò)張的卵泡少見,可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體。(7)PI組子代大鼠血清T水平明顯高于其余三組(P0.05)PM、PI組子代大鼠血清FSH水平高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。PI組子代大鼠血清LH、LH/FSH水平高于對照組,但差異不顯著(P0.05)。PCOS組、PM組、PI組子代大鼠血清E2水平均低于對照組,除PCOS組外,其余兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。PI組子代大鼠血清INS水平低于其余三組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(8)Real-time PCR顯示相對于對照組,PCOS子代組大鼠卵巢內(nèi)mi R-133b水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。PM子代組、PI子代組mi R-133b水平與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。PCOS子代鼠的TAGLN2表達(dá)水平與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(9)Western blot顯示與對照組相比,PCOS組子代大鼠卵巢中的TAGLN2表達(dá)水平與對照組相比無顯著性差異(P0.05)。PM組大鼠的卵巢中TAGLN2的表達(dá)水平與對照組相比,顯著性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。PI組其卵巢中的TAGLN2的表達(dá)水平也顯著降低(P0.01)。結(jié)論1、來曲唑誘導(dǎo)SD大鼠PCOS模型方法可行,模型鼠的卵巢病理改變、血清性激素水平變化與PCOS患者臨床表型相同。。2、PCOS大鼠卵巢中mi R-133b表達(dá)水平顯著性降低。3、mi R-133b可靶向調(diào)控TAGLN2的表達(dá)。增加mi R-133b可上調(diào)TAGLN2的表達(dá),改善PCOS大鼠的癥狀,增加妊娠率。4、干預(yù)母代PCOS大鼠的mi R-133b表達(dá)可影響其子代的mi R-133b表達(dá)及臨床表型。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R711.75
【部分圖文】：

第一部分 動(dòng)物模型的建立大鼠合籠代建模成功后，于下午18:00左右將雄性大鼠和雌性大鼠按1:2合籠，次道涂片，鏡下觀察若見到精子，記為妊娠第一天。卵巢切片HE染色石蠟切片．取材：將大鼠卵巢剪掉脂肪組織及輸卵管組織后，放入4%多聚甲醛中定時(shí)間小于24h。．脫水：用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇溶液脫水各40min，放100%乙醇中，重復(fù)3次，每次20min。

ptical density，OD），檢測波長為 450nm，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程式計(jì)的濃度。學(xué)方法 SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ X ±s態(tài)分布資料兩組間比較采用 t 檢驗(yàn)，四組間比較采用方差分析。非正態(tài)采用 Kruskal-Wallis 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用 <0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。情周期的改變模第 12 天開始，通過陰道涂片觀察大鼠動(dòng)情周期的改變，連續(xù)觀察期。結(jié)果如圖 2，PCOS 大鼠動(dòng)情周期明顯紊亂，無規(guī)律，且大多處。而對照組大鼠具有非常規(guī)律的動(dòng)情周期。

3.2大鼠卵巢組織外觀形態(tài)及組織學(xué)改變PCOS模型組大鼠的卵巢呈現(xiàn)桑葚狀，包膜下可見多個(gè)擴(kuò)張囊泡；而對照組大鼠卵巢無明顯異常，見圖3。對照組大鼠卵巢內(nèi)可見各級(jí)發(fā)育卵泡及黃體，顆粒細(xì)胞排列整齊；PCOS組大鼠卵巢內(nèi)各級(jí)卵泡及黃體少見，取而代之的是各種擴(kuò)張的囊泡，表面顆粒細(xì)胞數(shù)量減少，偶見的卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失，閉
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 劉艷麗;來曲唑法和脫氫表雄酮法誘導(dǎo)PCOS大鼠模型的比較研究[D];鄭州大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2889134